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全反式视黄酸与1,25-(OH)2D3联合应用对溃疡性结肠炎小鼠Th17相关细胞因子作用的实验研究
目的 研究全反式视黄酸(all-trans retinoic aciol,ATRA)与1,25-(OH)2D3联合作用对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠辅助性T细胞17 (Thelper17 cells,Th17)细胞相关因子表达的影响.方法 50只6周龄雌性SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、ATRA组、1,25-(OH)2 D3组与ATRA+1,25-(OH)2 D3联合组.对照组饮用蒸馏水,其余组饮用3.0％ DSS溶液造模.造模第3天起对3个干预组分别灌胃给予0.2 mg/d/只ATRA或/和100 ng/d/只1,25-(OH)2D3.第9天处死小鼠,取结肠组织,进行大体形态学评分;HE染色进行组织病理学评分;免疫组织化学法检测结肠IL-17、IL-23表达;ELISA测定结肠维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid acid receptor related orphanreceptors,RORγt)、IL-6和TGF-β表达.采用单因素方差分析进行组间比较,采用析因设计方差分析判断两因素联合是否有交互作用.结果 3个干预组与模型组比较,疾病活动指数(disease activity index,DAD、大体形态和组织病理学评分均降低,IL-17、RORγt,IL-23及IL-6表达量下降,ATRA+1,25-(OH)2D3联合干预组效果更显著(P＜0.05).结论 联合应用ATRA和1,25-(OH)2D3能更有效地抑制Th17相关因子的表达,减轻炎症,缓解结肠炎症状.
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MPTP模型小鼠中Th17及其炎症因子的作用研究
目的 研究辅助性T细胞17(Th17)细胞及其炎症因子在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)模型小鼠发病中的作用.方法 48只C57BL/6小鼠,随机分为帕金森病(PD)模型组和对照组,每组24只.PD模型组应用MPTP制备小鼠PD模型,对照组注射生理盐水制备对照模型,每个实验每组各取小鼠6只,分别检测行为学变化、中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、外周血炎症因子水平、中脑黑质中白细胞介素-17(IL-17)和维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)的基因和蛋白表达水平,并进行比较.结果 PD模型表现出肢体震颤、尾部僵直、运动减少等异常行为学反应,PD模型组转棒时间为(17.6±2.3)s显著短于对照组的(112.1±8.6)s,差异具有统计学意义(P<0.05).PD模型组中脑TH阳性反应的神经元数目较对照组明显减少.PD模型组外周血IL-17表达为(32.58±6.21)高于对照组的(7.46±2.10),差异有统计学意义(P<0.05).PD模型组中脑黑质中RORγt和IL-17的mRNA表达水平分别为(8.87±1.12)、(5.66±0.85)高于对照组的(2.64±0.52)、(2.08±0.41),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Th17细胞及其炎症因子可能通过外周免疫炎症反应和中枢神经系统免疫炎症反应协同作用参与PD的发生和发展.
关键词： 帕金森病 免疫炎症 辅助性T细胞17 白细胞介素-17 维甲酸相关核孤儿受体γt -
急性肺损伤患者外周血Th17细胞水平及功能的研究
目的 探讨Th17细胞在急性肺损伤发病中的作用.方法 以10名急性肺损伤患者和10名健康志愿者为研究对象,分别留取外周血标本.利用RT-PCR技术检测外周血中淋巴细胞所表达的RORγt mRNA的相对量,流式细胞仪检测外周血中Th17细胞的比例,ELISA法检测血浆中IL-17的水平.结果 RORγt mRNA在急性肺损伤组的表达水平(0.56±0.08)高于对照组(0.19±0.05),差异显著(P<0.01).Th17细胞在急性肺损伤组的比例(32.60±5.51)%高于对照组(12.29±1.71)%,差异有统计学意义(P<0.01).IL-17在急性肺损伤组的浓度(87.33±6.08)pg/ml明显高于对照组(52.71±3.19)pg/ml,P<0.01.结论 Th17细胞与急性肺损伤具有相关性,可能通过分泌IL-17来上调炎症反应,加重炎症反应的失控.
关键词： 急性肺损伤 Th17细胞 白细胞介素-17 维甲酸相关核孤儿受体γt -
Th17转录因子RORγt和BATF及Th17相关细胞因子在中性粒细胞亚型哮喘发病中的作用
目的:检测中性粒细胞亚型哮喘(NA)患者痰上清中辅助性T细胞17 (Th17)特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt (RORγt)、B细胞转录激活因子(BATF)及外周血中Th17细胞相关细胞因子白细胞介素8 (IL-8)、白细胞介素17 (IL-17)和白细胞介素22(IL-22)表达水平,探讨其在NA发病中的作用.方法:以56例支气管哮喘患者为研究对象,4.5％生理盐水雾化诱导痰,经细胞MGG染色进行哮喘的炎症亚型分型,分为嗜酸性粒细胞亚型哮喘(EA)组(26例)和NA组(30例),以常规体检者为健康对照组(NC组,28人).实时荧光定量PCR (RT-PCR)法检测痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平.空腹抽取各组研究对象肘静脉血10 mL,Ficoll密度梯度离心后分离外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法测定血清中IL-8、IL-17和IL-22蛋白表达水平,流式细胞术检测PBMC中Th17细胞(CD4+ IL-17+细胞)的百分率.结果:与NC组和EA组比较,NA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平均明显升高(P＜0.05);与NC组比较,EA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).与NC组和EA组比较,NA组患者痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平明显升高(P＜0.01).与NC组和EA组比较,NA组患者PBMC中Th17细胞百分率均明显升高(P＜0.01);与NC组比较,EA组患者PBMC中Th17细胞百分率差异无统计学意义(P＞0.05).结论:IL-17转录因子RORγt和BATF参与了NA患者气道炎症发生过程,且Th17细胞及其相关细胞因子IL-17和IL-22的异常表达与NA的全身反应有关联.
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补肾平喘膏方对支气管哮喘大鼠Th17/Treg平衡的影响
目的 观察支气管哮喘(哮喘)大鼠肺组织中维甲酸受体相关孤儿受体(RORyt)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)的变化情况以及补肾平喘膏方对其的影响,以探讨补肾平喘膏方防治哮喘的作用机制.方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、膏方预防组、膏方治疗组和膏方防治(预防+治疗)组,每组10只.除正常对照组外,其余各组大鼠以卵蛋白(OVA)致敏并诱发哮喘模型.采用地塞米松或膏方治疗(正常组与模型组除外)后,RT-PCR法检测肺组织中RORγt和Foxp3的mRNA表达情况.结果 模型组肺组织Foxp3 mRNA表达低于正常组(P＜0.01),经膏方干预的各组大鼠肺组织Foxp3 mRNA表达升高(P＜0.05),与正常组表达相似(P＞0.05),膏方各组组间差异无统计学意义(P＞0.05).模型组肺组织RORγtmRNA表达高于正常组(P＜0.01),经膏方干预的各组大鼠肺组织RORyt mRNA明显降低(P＜0.05),膏方各组组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 补肾平喘膏方可以通过调节哮喘大鼠RORγt/Foxp3平衡,改善Th17/Treg的失衡状态,从而防治哮喘.
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白细胞介素-17和维甲酸相关核孤儿受体γt在小鼠真菌性角膜炎中的表达
背景 CD4+效应T细胞(Th1/Th2)的平衡模式以往常用于解释真菌感染性疾病的免疫机制.近年来发现,除Th1和Th2细胞亚群外,Th17细胞亚群也参与抗真菌感染的免疫应答,但其在真菌性角膜炎中的作用却鲜有研究. 目的 探讨白细胞介素-17(IL-17)及Th17特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)在真菌性角膜炎中的表达变化及其意义.方法 将清洁级BALB/c小鼠96只按随机数字表法随机分为真菌性角膜炎模型组和损伤对照组,真菌性角膜炎模型组小鼠采用角膜表面镜术辅助上皮刮除并层间注入1×106 CFU/ml真菌菌液5μl法建立小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型,损伤对照组在角膜表面镜术辅助上皮刮除后层间注入等体积(5μl)的PBS液.采用质量分数10％ KOH湿片法检查菌丝,部分用接种法进行真菌培养并鉴定菌种,另一部分进行细菌培养以排除细菌污染.于造模后第1、3、5、7天在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜炎症的变化特点,参照Wu和Hu的方法对角膜炎症进行评分.分别于造模后第1、3、5、7天处死小鼠并获取角膜组织行苏木精-伊红染色,观察角膜组织的病理改变.采用real-time PCR技术检测IL-17mRNA及其特异性转录因子RORγt mRNA的表达水平,并用ELISA法检测IL-17蛋白在角膜组织中的表达.结果 造模后第1、3、5、7天角膜的炎症评分分别为(3.2±0.8)、(6.6±1.1)、(9.4±1.1)、(6.8±0.8)分,差异有统计学意义(F=89.786,P=0.010),其中第3天和第7天角膜炎症评分明显高于第1天,但低于第5天,差异均有统计学意义(P＜0.05)；角膜的组织病理学检测炎性细胞浸润情况与角膜炎症评分变化趋势一致.造模后第3、5、7天,IL-17 mRNA在真菌性角膜炎模型组小鼠角膜的表达分别为4.12±0.73、20.72±1.81、14.16±1.88,高于损伤对照组的0.35±0.17、0.28±0.09、0.22±0.09,差异均有统计学意义(P＜0.01),且组内比较第5天时表达量高于第1、3、7天值,差异有统计学意义(P＜0.01),真菌性角膜炎模型组IL-17蛋白在造模后第1、3、5、7天的表达量均明显高于损伤对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).真菌性角膜炎模型组各时间点RORγt mRNA在角膜组织中的表达变化与IL-17 mRNA的表达趋势一致(P＜0.01). 结论 IL-17及其特异性转录因子RORγt在真菌性角膜炎局部组织中的表达量均上调,其表达量变化的趋势与其炎症反应程度相关,推测Th17在真菌性角膜炎的免疫反应中发挥重要作用.
关键词： 真菌性角膜炎 白细胞介素-17 维甲酸相关核孤儿受体γt 免疫反应 -
病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌组织转录因子ROR-γt的表达
目的 观察Th17细胞特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptor γt,ROR-γt)在柯萨奇病毒B3 (coxsackie virus B3,CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌组织中的表达变化,初步探讨ROR-γt在病毒性心肌炎发病中的作用.方法 雄性BALB/c小鼠腹腔注射CVB3建立病毒性心肌炎小鼠模型(实验组),对照组小鼠腹腔注射等量的磷酸盐缓冲液,按注射后第0、1、2、3、4、6周分为6个时点亚组,每个时点亚组至相应时间取小鼠心脏,苏木精-伊红染色观察心肌病理改变、半定量反转录聚合酶链反应测定小鼠心肌组织ROR-γt mRNA的表达,Western - Blotting测定小鼠心肌组织ROR-γt蛋白的表达.结果 苏木精-伊红染色证实病毒性心肌炎模型构建成功.实验组小鼠中,1周亚组ROR-γt mRNA及其蛋白的表达较0周亚组升高,4周亚组表达高,6周亚组表达低于4周亚组但仍高于0周亚组;实验组各亚组ROR-γt mRNA及其蛋白的表达与相应时间对照组各亚组比较,差异均具有统计学意义(P均＜0.05).结论 Th17细胞特异性转录因子ROR-γt在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中呈高表达,且其变化趋势与Th17细胞改变趋势一致,提示ROR-γt通过参与病毒性心肌炎中Th17细胞的分化,可能参与病毒性心肌炎的免疫发病过程.
关键词： 心肌炎 维甲酸相关核孤儿受体γt 柯萨奇病毒B3 小鼠 -
多发性硬化患者Th17转录因子及相关细胞因子表达的研究
目的 检测多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者辅助性T细胞17(interleukin 17,Th17)特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoicr acid-related orphanreceptorγt,RORγt)、B细胞转录激活因子(B cell activating transcription factor,BATF)及细胞因子表达水平,探讨其在MS发病中的作用.方法 纳入缓解-复发型MS急性期患者及健康对照组各53例为研究对象,抽取MS患者治疗前、治疗4周后及健康人的空腹静脉血.检测血清中白细胞介素10(interleukin,IL)-10、IL-17和IL-27蛋白表达水平,PBMC中Th17细胞(CD4+IL-17+细胞)的百分率和BATF和RORγt mRNA表达水平.结果 与健康对照组比较,MS患者治疗前血浆IL-17[(31.01±8.41)ng/L,(P<0.05)]水平较高,而IL-10、IL-27[(53.74±13.14)、(138.35±17.48)ng/L]水平均较低,外周血PBMC中BATF和RORγt mRNA[(2.97±0.57)、(4.67±0.81),(均P<0.05)]表达水平均升高,Th17细胞(CD4+IL-17+细胞)百分率[(1.87％±0.37％),(P<0.05)]明显升高;与治疗前比较,MS患者治疗4周后血浆IL-17水平降低[(27.39±7.92)ng/L,(P<0.05)],相反IL-10、IL-27[(79.36±10.91)、(185.08±18.07)ng/L]水平均升高,BATF和RORγt mRNA表达水平[(1.73±0.34)、(2.03±1.04),(均P<0.05)]均降低,Th17细胞(CD4+IL-17+细胞)百分率[(0.83％±0.19％),(P<0.05)]明显降低;治疗后与健康对照组比较,IL-10与IL-17仍偏高(均P<0.05),而IL-27偏低(P<0.05),BATF和RORγt mRNA表达水平均升高,Th17细胞(CD4+IL-17+细胞)百分率明显升高(均P<0.05).结论 在MS患者外周血发现有Th17转录因子RORγt和BATF及Th17细胞及其相关细胞因子IL-10、IL-17和IL-27的改变.
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BATF、RORγt及IL-17在哮喘小鼠脾组织中的表达及意义
目的 探讨B细胞活化转录因子(BATF)、维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素-17(IL-17)在哮喘小鼠脾组织中的表达及意义.方法 将15只小鼠随机分为3组:生理盐水(NS)组、哮喘(AS)组和地塞米松(DXM)组,每组5只.利用卵清蛋白(OVA)造模.收集支气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞分类计数;HE染色观察肺组织病理改变:酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测脾组织中BATF、RORγt mRNA的表达量;并对上述指标的相关性进行分析.结果 1)与AS组相比,DXM组小鼠BALF白细胞(WBC)总数、中性粒细胞(NEU)数和嗜酸性粒细胞(EOS)数明显降低(P＜0.01).2)DXM组肺部炎症较AS组明显减轻.3)与AS组相比,DXM组脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度减低(P＜0.05).4)与AS组相比,DXM组脾组织中BATF、RORγt mRNA表达量减少(P＜0.01).5)脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度与BALF中WBC总数、NEU数、EOS数呈正相关(r=0.838、0.737、0.882,P均＜0.005);脾组织BATF mRNA的表达量与RORγt mRNA表达量、脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度呈正相关(r=0.807、0.833,P均＜0.005);脾组织RORγt mRNA的表达量与脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度呈正相关(r=0.890,P＜ 0.005).结论 1)在哮喘小鼠脾组织中BATF与RORγt可能共同调节IL-17的分泌,并通过IL-17的致炎作用参与哮喘气道炎症的发生发展.2)DXM可能通过BATF、RORγt途径部分阻止脾源性Th17细胞的分化,减少IL-17的分泌.
关键词： B细胞活化转录因子 维甲酸相关核孤儿受体γt IL-17 哮喘 -
维甲酸相关核孤儿受体γt和4-1BB/4-1BBL在口腔扁平苔藓中的表达及意义
目的 研究口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)和4-1BB/4-1BBL mRNA的表达.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测30例OLP患者和30例健康人外周血中RORγt和4-1BB/4-1BBL的基因表达水平.结果 在OLP患者中,RORγt、4-1BB、4-1BBL mRNA的表达水平显著高于对照组(P＜0.05),结果经2-△△CT转换后,OLP组3种基因mRNA表达水平分别是健康对照组的3.087、3.320和4.005倍.RORγt和4-1BB mRNA的表达水平无明显相关性(P＞0.05),4-1BB和4-1BBL mRNA表达水平呈正相关(r=0.455 0,P＜0.05).结论 RORγt和4-1BB/4-1BBL在OLP的发病中起了一定作用.
关键词： 维甲酸相关核孤儿受体γt 4-1BB 4-1BBL 口腔扁平苔藓
