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聚乙二醇化蛋白类药物文献资料
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ELISA法测定微生物谷氨酰胺转氨酶残留量
目的:建立微生物谷氨酰胺转氨酶(microbial transglutaminase,MTGase)残留量检测的酶联免疫吸附法(ELISA法),并进行方法学验证,用于MTGase催化偶联的生物制品的质量控制.方法:利用MTGase单抗和MTGase兔多抗,建立了MTGase的双抗体夹心ELISA方法,并验证了该方法的定量限、精密度和准确度、稀释可靠性、稳定性和专属性等,对3批PEG-IFNα2a原液进行重复测定.结果:该方法的定量限为0.165～10ng·mL-1,在0.05～40 ng·mL-1范围内拟合度高,R2＞0.99,板内和板间精密度和准确度均在(±)15％以内;样品经不同倍数稀释后,回归计算样品的准确度在±15％以内,精密度小于15％;样品室温放置2h或冻融1次和3次,结果显示质控样品采用该方法检测的精密度均小于15％,回收率为80％～ 120％;应用该方法在不同稀释倍数的PEG-IFN α2a原液中等量添加5 ng· mL-1质控样品,结果显示加标样品回收率为97.7％～101.1％.3批PEG-IFNα 2a原液MTGase残留量重复测定的板内和板间精密度均在15％以内,MTGase的残留量均低于总蛋白含量的0.01％.结论:ELISA法可用于生物制品中MTGase残留量的检定.
