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新基因mcpr1在小鼠牙胚发育中的时空表达和意义
目的:探讨mcpr1在牙胚发生过程中的可能作用.方法:采用免疫组化LsAB法观察MCPR1在小鼠牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况.结果:MCPR1在小鼠牙胚各个时期均有表达,但各期分布模式有所不同,帽状期开始在成釉器上皮细胞表达,在釉结节内亦呈现强阳性表达,在分化成熟的成牙本质细胞及成釉细胞内呈现出强阳性表达.结论:mcpr1可能通过上皮-间充质之间的信号传递及相关基因的相互调控,参与成釉器的成熟及牙胚的发育.
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mcpr1基因的真核表达载体的构建与鉴定
目的:构建腭裂相关基因mcpr1与pcDNA3.1/V5-His B融合的高效真核表达载体,为研究mcpr1基因的功能奠定基础.方法:根据mcpr1基因的核苷酸序列,设计并合成引物,通过PCR方法,从包含有mcpr1基因全长的克隆载体T-easy/ mcpr1中,扩增出该基因外显子片段,将扩增产物连接到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His B中.对该重组体进行PCR和酶切鉴定,以及测序验证.结果:以重组体为模板扩增出400 bp左右的特异性基因片段,与mcpr1基因片段大小一致,酶切鉴定也显示有400 bp左右的基因片断.测序结果显示与已知基因序列一致.结论:成功构建mcpr1基因的真核表达载体,为下一步研究mcpr1基因的功能奠定了基础.
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沉默Mcpr1促进大鼠牙乳头细胞增殖
目的:观察用RNAi技术沉默Mcpr1对大鼠牙乳头细胞增殖能力的影响.方法:分离培养原代大鼠牙乳头细胞,用KipofectamineTM2000将具有沉默Mcpr1作用的质粒pGenesil-shRNA、阴性对照的空载体转染大鼠牙乳头细胞,荧光显微镜观察转染效率,半定量PCR检测沉默效率,噻唑蓝(MTT)检测沉默Mcpr1后牙乳头细胞增殖能力的改变,流式细胞仪检测沉默Mcpr1后细胞周期的变化.结果:转染pGenesil-shRNA48 h后,Mcpr1的表达明显受到抑制,MTT结果显示转染pGenesil-shRNA后沉默组较末沉默组光吸收值明显增高,流式细胞仪检测沉默后的细胞周期在GO/GI期细胞比例明显下降.结论:pGensil-Mcpr1 shRNA载体能够抑制目的基因的表达.Mcpr1基因对牙乳头细胞的增殖具有明显的抑制作用.
