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ScFv活性文献资料
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抗人AFP单链抗体基因的构建和在大肠杆菌中的表达
目的构建抗人AFP 单链抗体(ScFv)的基因并转入大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达.分离纯化ScFv并鉴定其生物活性.方法用RT-PCR方法从能分泌特异性抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因.用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗人AFP单链抗体的基因.将ScFv基因克隆至pGEM-T载体构建,用限制性内切酶切以及测序鉴定.将ScFv基因连接到pET32 (a+)质粒,转化BL-21(DE3)细菌.抗性生长的克隆用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导4 h.溶解细菌并纯化ScFv,通过SDS-PAGE电泳及竞争抑制ELISA实验检测其活性.结果获得的VH含339 bp,来自小鼠IgG γ链,VL含312 bp,来自小鼠κ链. VH和VL通过编码(G4S)3连接肽的45 bp序列连接在一起构成含696 bp的ScFv基因.BL-21(DE3)中表达的ScFv抗体与融合蛋白(TrxA)融合在一起并以包涵体的形式存在.TrxA-ScFv相对分子质量约40×103,ScFv相对分子质量约24×103.竞争ELISA实验显示:TrxA-ScFv可抑制41%的McAb与抗原结合,而ScFv抗体则可抑制53%的McAb与抗原结合.结论我们成功构建了由696个碱基组成的抗人AFP单链抗体的基因,并在大肠杆菌获得了高效表达.该单链抗体具有较高的抗原结合活性.
