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环介导恒等温扩增技术文献资料
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LAMP技术用于志贺菌的检测
目的 依据环介导的恒等温扩增技术,建立一种新型的快速、准确、简单并方便检测食物中志贺菌的方法,为全面防治志贺菌导致的食物中毒提供依据.方法 本实验针志贺菌侵袭性质粒抗原ipaH基因的6个区域设计6条引物,利用链置换DNA聚合酶,在65℃左右的条件下反应60 min,短时间内快速完成核酸的扩增.反应结束后依据扩增副产物产生的焦磷酸镁沉淀的浊度,或使用SYBR Green Ⅰ颜色反应,判断ipaH是否为阳性,同时通过,琼脂糖凝胶电泳检测判断扩增产物的大小.结果 13例标准菌中,只有痢疾志贺菌LAMP产物呈混浊,加入SYBR Green Ⅰ显绿色且琼脂糖凝胶电泳有梯状亮带；痢疾志贺菌稀释106倍(约5 CFU/ml)之后仍然可以被LAMP检出而普通PCR检测不到.结论 LAMP技术可以快速、准确、特异性的检出志贺菌且方法简单、方便、灵敏度高于PCR,适合于室外现场使用.
关键词： 环介导恒等温扩增技术 PCR 痢疾志贺菌 检测体系
