首页 > 文献资料
-
ICAT的克隆及其抑癌作用
目的:克隆人ICAT的cDNA,在肿瘤细胞中表达,了解其对肿瘤细胞的抑制作用.方法:RT-PCR获得ICAT的cDNA,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ICAT,脂质体法转染MCF-7和MDA-MB231乳腺癌细胞,MTT法检测肿瘤细胞的增殖情况.结果:RT-PCR产物大小约为260bp.测序结果与文献报道一致.pcDNA3.1-ICAT转染MCF-7和MDA-MB231肿瘤细胞的效率约为26%,肿瘤细胞增殖的抑制率为18.1%和16.2%.结论:克隆了人ICAT并构建其真核表达质粒,转染肿瘤细胞后对其增殖有一定的抑制作用.
-
ICAT蛋白在HL60细胞向单核系分化前后表达差异的验证及其功能研究
目的:对HL60细胞在NSC67657作用下向单核系分化前后,双向电泳分离的表达差异蛋白β-catenin相关蛋白1(Beta-catonin-interacting protein 1,ICAT)进行验证,并对ICAT在细胞分化中的功能进行研究.方法:通过RT-PCB和Western blot方法验证药物作用细胞前后ICAT基因和蛋白的表达差异;通过免疫荧光协同分析目的蛋白的表达水平,并对其进行初步定位.构建pDsRed-ICAT真核表达载体,转染HL60细胞,筛选阳性克隆.对ICAT基因重组质粒转染细胞作细胞形态学、细胞增殖改变的观察和细胞周期检测以及超微结构观察.结果:NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化,ICAT蛋白表达上调,其主要定位于细胞核和胞质.真核表达载体构建成功,电转后G418筛选可得90%以上阳性克隆.转染重组质粒的HL60细胞增殖受抑,电镜下胞核异染色质密集,核质比减小,表面抗原CD14表达和对照组无差异,但在药物处理后24h即可表达71.3%,明显高于对照组,瑞氏染色可见明显分化细胞.结论:ICAT蛋白在NSC67657诱导HL60细胞分化中表达上调,但仅是过表达的ICAT基因并不能诱导HL60细胞向单核系分化,却能提高HL60细胞对NSC67657诱导作用的敏感性.
