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肾癌细胞来源exosome的制备和免疫相关蛋白组成的初步研究
目的:分离纯化肾癌细胞分泌的exosome,检测exosome免疫相关蛋白的组成,探讨其潜在的临床应用价值.方法:体外培养人肾癌细胞株Rc-2.用超滤和蔗糖重水密度梯度超速离心法分离纯化exosome,透射电镜观察其形态,Western blot检测其免疫相关蛋白的组成.结果:用超滤和蔗糖重水密度梯度超速离心法成功分离出exosome.透射电镜下exosome为类圆碟形,具有双层膜结构,直径30-100 nm.exosome表达肾癌特异性抗原G250、热休克蛋白70(Heat shock protein70,HsP70)和细胞间粘附分子(Intercellular Adhesion Molecule-1,ICAM-1).结论:超滤和蔗糖重水密度梯度超速离心法可以分离纯化肾癌细胞分泌的exosome,exosome表达免疫相关蛋白G250、HSP70、ICAM-l.其负载肾癌特异性抗原,具有免疫原性,可望成为治疗肾癌的新疫苗.
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结核分枝杆菌免疫相关蛋白PPE68的表达及免疫原性的研究
目的:克隆、表达结核分枝杆菌PPE家族蛋白PPE68的编码基因Rv3873,并初步探索PPE68诱导Balb/c小鼠脾淋巴细胞的增殖活性,为进一步研究PPE68的免疫功能提供实验依据.方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv3873基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pET32a(+),获得重组表达质粒,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达,纯化表达产物,通过XTT比色法检测重组蛋白PPE68诱导脾淋巴细胞的增殖活性.结果:重组质粒pETRv3873构建成功,57kDa的His-PPE68融合蛋白在大肠杆菌中稳定表达,并具有刺激Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖的功能.结论:PPE68蛋白具有较强的免疫原性,其免疫学功能具有进一步研究的价值.
