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β-淀粉样肽(A β)文献资料
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含Aβ1-15的嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备及其免疫原性分析
目的:原核表达并纯化含β -淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)氨基段15肽(Aβ115)和删除c/el表位的截断型HBcAg的融合蛋白,观察其形成的病毒样颗粒,检测其免疫原性,为阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)基因工程疫苗的研究提供基础.方法:将合成的A β 1-15基因连接于HBcAg的1～71的3 ′端,再将HBcAg的88～144位氨基酸的基因片断连接于Aβ1.15的基因的3′端,构建重组质粒pUC/c-Aβ15-c,将重组基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pET/ c-A β 15-c.异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D- 1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导、SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色检测重组基因的表达.表达的融合蛋白(命名为CA15C)纯化后,透射电镜观察病毒样颗粒的形成.以病毒颗粒抗原CA15C腹腔注射免疫昆明小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗-A β抗体的滴度.结果:经酶切鉴定、DNA序列测定证实,目的基因重组于表达质粒之中,与理论设计相符.诱导表达后,在细菌裂解液的上清和沉淀中均可见表达蛋白CA15C,以沉淀中为多,约占细菌沉淀总蛋白的40％.电镜下可见纯化后的CA15C形成直径约30 nm的病毒样颗粒.昆明小鼠经CA15C免疫5次后,其血清中抗-Aβ抗体的滴度可达1∶10000,且检测不到抗-HBc抗体.结论:原核表达制备的含Aβ 1.15和HBcAg的融合蛋白CA15C,可形成病毒样颗粒,有较强的免疫原性.
关键词： β-淀粉样肽(A β) HBcAg 融合蛋白 病毒样颗粒 基因工程疫苗
