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目的:为克隆构建DNA防龋疫苗制备出表达片段.方法: 酶切电泳鉴定含pac基因的重组质粒;用计算机辅助选定pac基因中重要区域并设计引物, 对其进行PCR扩增,酶切电泳鉴定扩增产物.结果:pPC41重组质粒包含pac 基因; 自pac基因中选定的核苷酸序列为模板所扩增的DNA片段为预期目的片段.结论:对含pac基因重要抗原决定簇区域的成功扩增为构建基因重组防龋疫苗完成了重要的准备工作.
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变形链球菌表面蛋白PAc结构基因克隆工程数据分析
目的:使变形链球菌重要毒力因子PAc蛋白编码基因pac的遗传工程背景清晰化,以利于克隆构建DNA防龋疫苗. 方法:运用DNASIS计算机分析软件包对pac全基因DNA序列进行酶切图谱,开放阅读框,遗传密码子,编码蛋白等结构参数分析,并就pac基因克隆化方案作出探讨. 结果:pac基因中多个限制性内切酶切点可供制取含重要功能域的目的DNA片段以克隆化;重要密码子及开放阅读框的阐述可帮助准确制定编码产生正确PAc读框的克隆方案.结论:pac基因的遗传工程背景资料分析增强了其克隆化方案的可操作性.
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重组质粒pCIA-P在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达研究
目的证实重组质粒pCIA-P可编码表达具有变形链球菌S.mutans表面蛋白PAc抗原性的表达产物.方法在选择合适的原核表达系统后,诱导外源基因表达出目的蛋白,通过蛋白质电泳技术及免疫印迹法检测表达蛋白,以观察pac基因重要抗原决定簇编码区DNA片段在原核细胞中的表达情况.结果克隆片段在原核系统下可完成表达,表达产物保存了S.mutans表面抗原的免疫原性.结论该实验为探索出一种简便快捷地检测与分析重组DNA疫苗表达产物的分子量及抗原性的方法提供了实验依据.
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变形链球菌表面蛋白PAc功能区基因重组质粒的亚克隆构建
将变形链球菌pac基因待表达部分克隆人哺乳动物表达质粒中构建成将用作DNA免疫防龋研究的重组质粒.用PCR扩增出pac基因的2个高度保守区域,扩增产物以pGEM-T为载体进行亚克隆后,再克隆至高效哺乳动物表达质粒pCI构建成重组体,重组质粒pCIA-P经限制性酶切分析及DNA测序分析证实克隆构建正确.对含pac基因重要抗原决定簇区域的成功克隆为DNA免疫防龋研究完成了重要准备.
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基因重组鼠伤寒沙门氏菌防龋疫苗的研究Ⅰ.变形链球菌pac基因上游区序列测定和分析
目的:对变形链球菌表面蛋白pac基因上游区进行序列测定和分析.方法:通过应用PCR测序试剂盒和DNA自动测序仪ABI310对变形链球菌表面蛋白pac基因上游区进行序列测定.结果:测定了pac基因上游区内的517个碱基序列.结论:变形链球菌表面蛋白pac基因上游区序列测定为基因重组鼠伤寒沙门氏菌防龋疫苗的研究提供了基础资料.
