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胃癌研究中实时定量PCR实验内参基因的选择
目的 寻找胃癌研究中较为恒定和适宜作为内参基因.方法 选取50例术后胃癌组织和癌旁组织,1株胃正常上皮细胞株和6株胃癌细胞株,分别提取组织和细胞总RNA.qRT-PCR(real time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction)实时定量方法检测内参基因GAPDH(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)、ACTB([-actin)、RPⅡ(RNA polymerase subunit Ⅱ)和18sRNA在上述两组样本中的表达量,对比四种基因表达的变化.选择肿瘤标志物癌胚抗原CEA(carcino-embryonic antigen)作为待测目的基因,分别用上述4种基因作为内参,用相对定量qRT-PCR的方法在上述组织和细胞中检测CEA的表达.使用geNorm软件分析优化的内参基因.结果 与癌旁组织相比,对应癌组织中GAPDH、ACTB、RPⅡ的表达均发生明显表达上调(P＜0.05),上调倍数分别约为(6.49±1.12)、(5.02±0.87)和(3.68±0.78)倍.而18sRNA在两种组织中未发生明显表达变化(P＞0.05).GAPDH、ACTB、RPⅡ和18sRNA在胃正常上皮细胞和胃癌细胞中表达水平未发生明显变化.用GAPDH、ACTB、RPⅡ作为内参基因时,CEAmRNA上升的倍数和比率均明显减小(P＜0.05).用18sRNA作为内参时,CEA在癌组织中表达明显上升,上升倍数为(2.87±0.56)倍,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在各种组织和细胞中没有完全恒定的内参基因.18sRNA可作为qRT-PCR实验检测胃组织基因表达适宜的内参基因.
