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基质细胞源性因子-1α/CXC趋化因子受体-4信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-435侵袭的影响
目的 观察基质细胞源性因子-1 α(SDF-1α)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-435侵袭能力的影响.方法 将人乳腺癌细胞株MDA-MB-435分为3组:CXCR4小干扰RNA (siRNA)干扰组、阴性对照siRNA组、空白对照组.实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot分别检测CXCR4 siRNA转染MDA-MB-435细胞前后CXCR4mRNA和蛋白表达水平的差异,Transwell侵袭实验检测CXCR4下调对MDA-MB-435细胞侵袭能力的影响.结果 CXCR4siRNA能够显著降低MDA-MB-435细胞中CXCR4mRNA和蛋白水平的表达,差异均有统计学意义(P＜0.05);Transwell侵袭实验中CXCR4siRNA干扰组穿透基底膜的细胞数为(23.4±1.5)个,明显少于阴性对照siRNA组[(66.2±3.0)个]及空白对照组[(68.2±2.2)个],差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CXCR4可能在调节乳腺癌侵袭转移过程中发挥十分重要的作用.
关键词： CXC趋化因子受体-4 乳腺癌 侵袭 -
基质细胞源性因子-1/CXC趋化因子受体-4轴调控髓核细胞凋亡的机制
目的 探讨基质细胞源性因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体-4(CXCR4)轴对髓核细胞细胞凋亡的影响及其机制.方法 体外培养大鼠髓核细胞,应用不同浓度的SDF-1α与CXCR4拮抗剂AMD3100进行干预;流式细胞仪检测细胞的凋亡,噻唑蓝(MTT)实验检测对细胞增殖的影响,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、-8、-9酶活性试剂盒检测Caspase-3、-8、-9酶活性,Western blot法检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)同源拮抗剂(bak)表达.结果 SDF-1α(0、50、100、150 μg/L)呈浓度依赖性促进髓核细胞凋亡,凋亡率分别为(5.278±0.562)％、(10.327±1.216)％、(18.634 ±2.632)％、(28.376 ±3.561)％;随SDF-1α浓度的升高,细胞活力明显受抑制,细胞活力为(99.72±0.49)％、(87.26±1.85)％、(75.79±2.89)％、(61.05±4.17)％,(P＜0.01).随SDF-1α浓度的升高,Caspase-3、-9酶的活性明显增加、bak蛋白的表达明显增加(P＜0.05).SDF-1α与AMD3100联合应用处理髓核细胞,与单独使用SDF-1α相比,细胞凋亡明显减少、细胞活力明显增加、Caspase-3和-9酶的活性明显降低、bak蛋白的表达明显减少(P＜0.05).结论 SDF-1α促进大鼠髓核细胞的凋亡、抑制其增殖,作用机制为上调bak蛋白的表达,进而内源性凋亡途径的激活.
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持续高表达CXC趋化因子受体-4重组慢病毒颗粒的包装鉴定及细胞迁移
目的 观察持续高表达CXC趋化因子受体-4(CXCR4)慢病毒颗粒在细胞迁移的作用.方法 从大鼠大脑组织提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)得到大鼠cDNA文库,以cDNA为模板,经过PCR获得CXCR4基因,测序正确后连接到pCDH1-MCS-EF1-copGFP(慢病毒载体质粒),与第3代慢病毒其余辅助质粒pMDLG/pRRE、pRsv-Rev及pVSV-G按照1∶4∶ 1∶1共转染293T细胞包装慢病毒,超离慢病毒,测定病毒滴度,感染Hela细胞72h与14 d后,分别观察Hela细胞荧光,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定Hela细胞表达大鼠CXCR4 mRNA含量,Transwell小室观察细胞迁移.结果 测序CXCR4基因序列正确,并成功连接到pCDH1-MCS-EF1-copGFP,利用第3代慢病毒包装系统成功包装慢病毒,经超离慢病毒颗粒,流式细胞仪测定慢病毒滴度为7.89×105,持续观察Hela细胞荧光强度,Real-time PCR检测结果示Hela细胞表达大鼠CXCR4 mRNA水平显著升高(72 h为78.29倍,至14 d为58.93倍),Transwell小室观察到高表达CXCR4的慢病毒颗粒感染组细胞迁移多(P＜0.05).结论 高效感染力并持续高表达CXCR4的慢病毒颗粒可持续促进细胞迁移,并有基质细胞衍生因子-1 α(SDF-1o)浓度依赖性.
关键词： CXC趋化因子受体-4 基质细胞衍生因子-1α 慢病毒 细胞迁移 -
缺血再灌注肾损伤微环境影响骨髓间充质干细胞表面CXC趋化因子受体-4表达
目的 观察缺血再灌注(I/R)肾损伤微环境对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)表面CXC趋化因子受体-4(CXCR4)表达及肾保护性细胞因子分泌的影响.方法 制作不同浓度I/R肾损伤组织匀浆,与BMSCs共培养.激光共聚焦显微镜观察BMSCs表面CXCR4受体表达;Transwell实验检测BMSCs向基质细胞源性因子-1(SDF-1)的迁移能力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测基质细胞源性因子-1α(SDF-1α)、CXCR4、肝细胞生长因子(HGF) mRNA表达.结果 I/R肾损伤匀浆诱导BMSCs表面CXCR4表达明显上升(P＜0.01);该表达可被CXCR4中和抗体所抑制(P＜0.05).CXCR4表达增加后,BMSCs向SDF-1的迁移能力增强[(26.72±5.61)、(30.44 ±6.03)、(38.92 ±6.79)/cm2比(18.47 ±5.02)/cm2,P＜0.01].I/R肾损伤匀浆能够显著上调SDF-1α mRNA表达,但各组间表达差异无统计学意义(P＞0.05).肾损伤匀浆能够显著上调CXCR4mRNA(3.11 ±0.24比2.02 ±0.17,P＜0.01)和HGF mRNA(3.01 ±0.46比1.99 ±0.21,P＜0.01)表达,表达随匀浆浓度增加而升高,升高的表达可被CXCR4中和抗体所抑制(1.86±0.11,1.78±0.22,P＜0.05).结论 I/R肾损伤微环境能够通过提高BMSCs表面CXCR4受体表达促进BBMSCs迁移,活化的BMSCs上调保护性细胞因子表达,形成有利于肾损伤修复的微环境.
关键词： 肾缺血 再灌注损伤 骨髓间充质干细胞 CXC趋化因子受体-4 -
CXC趋化因子受体-4和生存素在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨CXC趋化因子受体-4(CXCR4)和生存素(Survivin)蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测64例肺癌组织标本及癌旁组织CXCR4和Survivin的表达,分析其表达与临床病理参数及预后的关系.结果 64例肺癌组织中有41例CXCR4蛋白阳性表达和43例Survivin蛋白阳性表达,阳性表达率分别为64.1％和67.2％,正常肺组织呈阴性表达(P＜0.01);CXCR4和Survivin蛋白表达与TNM分期、淋巴结转移和组织分化程度有关(P＜0.05);肺癌中CXCR4和Survivin蛋白表达呈正相关(r=0.448 P＜0.05).结论 CXCR4和Survivin蛋白在肺癌中高表达,两者在肺癌的发展中相互促进.
关键词： 非小细胞肺癌 CXC趋化因子受体-4 生存素 -
5-杂氮-2′-脱氧胞苷对实验性乳腺癌肺转移的影响
目的 探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MDA-MB-231细胞实验性肺转移的影响及可能的机制.方法 将MDA-MB-231细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,通过半定量RTPCR(SqaT-PCR)与甲基化特异性PCR(MSP)方法检测两组细胞的乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1),CXC趋化因子受体-4(CXCR4)基因的mRNA表达及启动子区甲基化的状况.分别将两组细胞通过边缘尾静脉注射至BALB/c nu/nu裸鼠体内(每组5只).5周后,用荧光定量 RT-PCR(FqRT-PCR)检测裸鼠肺组织内的目的基因HPRT及内参GAPDH的mRNA丰度.结果 对照组和处理组细胞的BRMS1相对灰度值(IDV)分别为0与0.39±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达较对照组明显上调(P<0.05).5-Aza-CdR使BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化;CXCR4相对IDV分别为0.58±0.003与0.58±0.01,两组间差异无统计学意义(P>0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变.对照组与处理组细胞的裸鼠肺脏HPRT和GAPDH的Ct值分别为:24.75 ±1.55,16.19±0.69与27.61±1.67,17.48±0.96,2-ΔΔct=0.34,处理组裸鼠肺脏HPRT mRNA丰度明显低于对照组,肺组织内转移癌较少.结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,从而降低了MDA-MB-231细胞实验性肺转移能力.
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5-杂氮-2′-脱氧胞苷降低了乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外迁移能力
目的 探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外迁移能力的作用及可能的机制.方法 实验分为对照组与5-Aza-CdR处理组,分别通过Transwell趋化迁移及划痕实验、半定量逆转录PCR(SqRT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)等方法检测MDA-MB-231细胞的体外迁移能力、乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1)与CXC趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达、BRMS1与CXCR4启动子区甲基化状况.结果 对照组与处理组细胞穿过Transwell聚碳酸酯滤膜的数量分别为1 290.00±214.64与673.00±44.00,处理组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05);24、36、48 h时间点对照组与处理组细胞划痕愈合率分别为20.34±0.69、59.31±0.38、91.77±0.13 与 20.19±0.67、49.32±0.24、69.47±0.46,其中36 h与48 h时间点处理组愈合率明显降低(P<0.05);对照组与处理组BRMS1的相对于内参GAPDH的灰度值(IDV)分别为0与0.39±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达明显上调(P<0.05),5-Aza-CdR使 BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化,对照组与处理组CXCR4的相对于内参GAPDH 的IDV分别为0.58±0.003与0.58±0.01,两组比较差异无统计学意义(P>0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变.结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,从而降低了MDA-MB-231细胞体外迁移能力.
