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BRMS1基因对人直肠癌裸鼠成瘤性及转移能力的影响
目的 探讨转移抑制BRMS1基因对人直肠癌裸鼠成瘤性以及抑制肿瘤细胞远处转移的影响.方法 通过将BRMS1基因导入人直肠癌细胞株LOVO中,建立裸鼠实验性转移模型和自发性转移模型,观察转染组(A组)、空载体组(B组)、未转柒组(C组)裸鼠的生长状态和肿瘤远处转移状况.结果 自发性转移模型:A1组转染组细胞、B1组转染空载体组细胞和C1组转染组癌细胞接种后裸鼠的体质量及肿瘤平均直径无统计学差异(P＞0.05).实验性转移模型:转染空载体组B2和未转染组C2的裸鼠肺脏转移率为100％；转染组A2组肺脏和肝脏转移灶的病理分级标准较B2组和C2组降低,A2组肺转移分级以Ⅱ级为主,B2组、C2组以Ⅱ级、Ⅲ级为主；A2组未见肝转移灶,而B2组、C2组肝转移分级以Ⅰ级、Ⅱ级为主.结论 BRMS1基因能够明显抑制直肠癌LOVO细胞的远处转移的能力,但并不影响肿瘤细胞本身的生长,提示BRMS1基因可能成为抑制直肠癌远处转移的新靶点.
关键词： 乳腺癌转移抑制基因-1 直肠肿瘤 基因治疗 远处转移 转移抑制基因 -
乳腺癌转移抑制基因1通过金属蛋白酶组织抑制因子-2/基质金属蛋白酶-2途径抑制胶质瘤细胞侵袭
目的 探讨抑癌基因乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)影响胶质瘤细胞侵袭的机制.方法 将真核表达质粒pEGFP-BRMS1和对照质粒pEGFP-N2分别转入人胶质瘤U251和U87细胞中,Western blot技术检测BRMS1蛋白表达,人工基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力,明胶酶谱实验检测胶质瘤细胞分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的活性,Western blot检测金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)及MMP-2蛋白表达.结果 与对照组比较,转染pEGFP-BRMS1质粒24 h后U251和U87细胞侵袭力分别下降了43％和52％,差异均有统计学意义(P＜0.01)；转染BRMS1可以明显抑制2种胶质瘤细胞分泌MMP-2活性；pEGFP-BRMS1可以通过上调TIMP-2的表达从而抑制MMP-2蛋白表达.结论 BRMS1可以通过增加TIMP-2表达进而抑制MMP-2的表达,打破TIMP-2/MMP-2平衡,终抑制胶质瘤细胞侵袭能力.
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5-杂氮-2′-脱氧胞苷对实验性乳腺癌肺转移的影响
目的 探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MDA-MB-231细胞实验性肺转移的影响及可能的机制.方法 将MDA-MB-231细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,通过半定量RTPCR(SqaT-PCR)与甲基化特异性PCR(MSP)方法检测两组细胞的乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1),CXC趋化因子受体-4(CXCR4)基因的mRNA表达及启动子区甲基化的状况.分别将两组细胞通过边缘尾静脉注射至BALB/c nu/nu裸鼠体内(每组5只).5周后,用荧光定量 RT-PCR(FqRT-PCR)检测裸鼠肺组织内的目的基因HPRT及内参GAPDH的mRNA丰度.结果 对照组和处理组细胞的BRMS1相对灰度值(IDV)分别为0与0.39±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达较对照组明显上调(P<0.05).5-Aza-CdR使BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化;CXCR4相对IDV分别为0.58±0.003与0.58±0.01,两组间差异无统计学意义(P>0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变.对照组与处理组细胞的裸鼠肺脏HPRT和GAPDH的Ct值分别为:24.75 ±1.55,16.19±0.69与27.61±1.67,17.48±0.96,2-ΔΔct=0.34,处理组裸鼠肺脏HPRT mRNA丰度明显低于对照组,肺组织内转移癌较少.结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,从而降低了MDA-MB-231细胞实验性肺转移能力.
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5-杂氮-2′-脱氧胞苷降低了乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外迁移能力
目的 探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外迁移能力的作用及可能的机制.方法 实验分为对照组与5-Aza-CdR处理组,分别通过Transwell趋化迁移及划痕实验、半定量逆转录PCR(SqRT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)等方法检测MDA-MB-231细胞的体外迁移能力、乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1)与CXC趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达、BRMS1与CXCR4启动子区甲基化状况.结果 对照组与处理组细胞穿过Transwell聚碳酸酯滤膜的数量分别为1 290.00±214.64与673.00±44.00,处理组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05);24、36、48 h时间点对照组与处理组细胞划痕愈合率分别为20.34±0.69、59.31±0.38、91.77±0.13 与 20.19±0.67、49.32±0.24、69.47±0.46,其中36 h与48 h时间点处理组愈合率明显降低(P<0.05);对照组与处理组BRMS1的相对于内参GAPDH的灰度值(IDV)分别为0与0.39±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达明显上调(P<0.05),5-Aza-CdR使 BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化,对照组与处理组CXCR4的相对于内参GAPDH 的IDV分别为0.58±0.003与0.58±0.01,两组比较差异无统计学意义(P>0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变.结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,从而降低了MDA-MB-231细胞体外迁移能力.
