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妊娠期糖尿病胎鼠肺发育与mTOR关系的研究
目的 探讨妊娠期糖尿病胎鼠在宫内高血糖环境中,胎肺发育异常,其表面活性蛋白SP-B(surfactant protein,SP-B)、SP-C(surfactant protein,SP-C)的表达及与雷帕霉素靶蛋白mTOR(mammalian target of rapamycin,mTOR)及p-mTOR的相关性.方法 妊娠大鼠分成实验组(糖尿病组),干预组(糖尿病模型+雷帕霉素)及对照组(柠檬酸缓冲液).光镜下观察各组孕21 d胎肺组织的大体形态结构;通过免疫组化技术及Western印迹技术检测各组胎肺组织中p-mTOR、SP-B、SP-C的定位表达和蛋白表达水平;利用RT-PCR技术检测胎肺组织中SP-B、SP-C的mRNAs表达水平.结果 与对照组相比,糖尿病组与干预组胎肺肺泡腔减小,数量增多,肺泡间隔明显增厚,胎肺结构发育差.免疫组化及Western印迹结果显示,与对照组相比,糖尿病组p-mTOR、mTOR在胎肺组织中的表达明显增加,SP-B、SP-C蛋白表达水平明显降低;而干预组各蛋白表达水平介于对照组和糖尿病组之间.RT-PCR结果显示,与对照组相比,GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C mRNAs相对平均量显著性减少,而干预组中SP-B、SP-C mRNAs水平与GDM组相比显著性增加.结论 妊娠期糖尿病胎鼠肺发育异常,表面活性蛋白SP-B、SP-C合成、 分泌减少,可能与异常激活的mTOR表达增高有关.
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PLAGL2基因siRNA表达质粒的构建及体外干扰作用
目的 构建PLAGL2 siRNA表达载体质粒并探讨其体外干扰作用.方法 构建的PLAGL2 siRNA表达载体质粒经脂质体介导转染到小鼠肺Ⅱ型上皮细胞株H441细胞中并获得稳定细胞株,采用实时荧光PCR及Western blot技术分别检测转染组和野生型H441细胞中PLAGL2、SP-C、SP-B mRNA和PLAGL2蛋白表达水平的变化.结果 实时荧光PCR检测结果显示:与野生型H441细胞相比较,PLAGL2 siRNA表达载体质粒转染的H441细胞中PLA-GL2 mRNA水平明显降低(P<0.05),SP-C mRNA水平明显增高(P<0.05),而SP-B mRNA水平没有明显差异(P>0.05);Western blot检测结果显示:与野生型H441细胞相比较,PLAGL2 siRNA表达载体质粒转染的H441细胞中PLAGL2蛋白表达水平明显降低(P<0.05).结论 成功构建了PLAGL2 siRNA表达载体,将其转染至H441细胞中可有效抑制PLAGL2基因的表达,同时促进SP-C基因的表达.
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肺表面活性蛋白C启动子变异与早产儿呼吸窘迫综合征关系的研究
目的:研究分析肺表面活性蛋白C(SP-C)启动子变异与早产儿呼吸窘迫综合征(RDS)的关系.方法:以SP-C启动子上的3个SNP位点(rs8192321,rs8192335和rs8192337)为研究对象,应用质谱分析技术对207例早产儿[其中RDS123例(病例组),非RDS84例(对照组)]进行基因型分型,比较两组的基因型的分布情况,并与HapMap数据库中其他种族的基因型频率进行比较分析.结果:在rs8192321位点和rs8192335位点上未发现变异;rs8192337位点在对照组中检出1例杂合基因型,其余及病例组均无变异.所有位点的基因型频率在病例组和对照组间无显著差异(P＞0.05).经与HapMap数据库中其他种族比较,欧洲人群的变异基因型频率显著高于中国广西人群.结论:SP-C启动子3个位点在中国广西早产儿中变异频率较低,不构成早产儿RDS发病的高危因素.
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STAT3对大鼠重症急性胰腺炎血清体外作用AT-ⅡSP-C的影响
目的 探讨信号转导-转录活化因子3(Stat3)信号通路在大鼠重症急性胰腺炎血清体外作用于肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)的影响.方法 原代培养肺泡Ⅱ型上皮细胞分成:①对照组:加入不含大鼠胰腺炎血清的DMEM培养液的正常AT-Ⅱ;②SAP组:加入含大鼠胰腺炎血清的DMEM培养液的正常AT-Ⅱ;③SAP+AG490组:用AG490预处理细胞,加入含大鼠胰腺炎血清的DMEM培养液的正常AT-Ⅱ.EMSA法测STAT3活化状态;RT-PCR检测mRNA水平;流式细胞技术检测AT-ⅡSP-C表达.结果 与对照组比,SAP组STAT3活性增强, STAT3 mRNA表达增强(P<0.05),SP-C 蛋白表达下降(P<0.01);与SAP组比,SAP+AG490组STAT3活性减弱,STAT3mRNA表达减弱(P<0.01),SP-C 蛋白表达下降(P<0.01).结论 JAK激酶/转录信号传导和激活因子3(Stat3)信号传导通路参与重症急性胰腺炎中AT-Ⅱ的损伤的病理生理过程.
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高氧诱导新生鼠肺上皮细胞凋亡损伤与SP-C、SP-D变化的研究进展
长时间吸入高体积分数氧(高氧)可致高氧肺损伤,是导致新生儿支气管肺发育不良发生、发展的一个重要因素.高氧肺损伤的发病机制十分复杂,近年来研究表明,细胞凋亡是高氧肺损伤的一个重要组织学特点,在其发病过程中具有十分重要的作用.肺表面活性蛋白( surfactant protein)在机体肺部防御和先天性免疫方面发挥着重要作用.目前的研究表明,肺表面活性蛋白参与多种肺部疾病的发生、发展.
