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ATM和ATR:在G2-M期阻滞与凋亡中的作用及相互关系
ATR和ATM是DNA损伤引起的G2-M期阻滞的主要信号因子,它们通过调节不同的细胞因子在细胞G2-M期阻滞中发挥不同的作用,并且它们相互作用在诱发细胞凋亡方面也有重要意义.本文着重阐述了近年来报道的有关ATR和ATM在G2-M期阻滞与凋亡中的作用及相互关系方面的研究进展.
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毛蚶抗癌蛋白对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用
目的:从毛蚶软体部位中分离出具有一定抗癌活性的毛蚶蛋白组分,研究其对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用.方法:以新鲜毛蚶软体部分为原材料,分离获得毛蚶抗癌蛋白组分(命名为NS);倒置相差显微镜观察不同浓度(50、100、200、400μg/mL)NS组分对MCF-7癌细胞生长的影响,将200 μg/mL NS组分作用MCF-7细胞不同时间(12、24、48 h)后,Giemsa染色观察癌细胞及核形态的变化,流式细胞术检测NS组分对MCF-7细胞周期及细胞凋亡的影响,Western blot检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果:与阴性对照组比较,各浓度NS组分对人乳腺癌MCF-7细胞生长均具有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01);倒置相差显微镜下可见200 μg/mL NS组分作用MCF-7细胞12 h后,部分细胞收缩变圆、脱落,24、48 h后细胞脱落现象更加明显;Giemsa染色发现,NS组分处理12h后细胞出现有丝分裂相增加,继而出现多核或核碎裂等现象;流式细胞术检测发现NS组分主要引起细胞G2-M期阻滞;NS处理组凋亡率均较对照组明显升高(P均＜0.01),且随着药物作用时间的延长,细胞凋亡比例逐渐增加.Western blot检测发现NS组分作用MCF-7细胞后p53及procaspase-3蛋白表达量均上调.结论:毛蚶抗癌蛋白NS组分体外对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞毒作用主要通过引起细胞发生G2-M期阻滞、诱导细胞凋亡实现的,期间伴随p53及procaspase-3蛋白表达上调.
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毛蚶蛋白抗肿瘤活性研究
目的：分离得到毛蚶蛋白活性组分并研究其体外抗肿瘤机制及对免疫细胞的作用。方法：低温水提及硫酸铵沉淀法获取毛蚶蛋白活性组分；MTT法检测50、100、200和400μg/mL的毛蚶蛋白活性组分分别作用24、48和72 h后对人结直肠癌细胞HT-29、HCT116，人肝癌细胞HepG-2，人肺癌细胞A549的细胞毒活性；倒置相差显微镜下观察细胞活性及Giemsa染色观察毛蚶蛋白活性组分对肿瘤细胞及核形态变化的影响，流式细胞术检测毛蚶蛋白活性组分对人结直肠癌HT-29细胞周期及凋亡的影响；MTT法检测毛蚶蛋白活性组分对小鼠巨噬细胞RAW264.7生长的影响，中性红法测定其对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬能力的影响，Griess法检测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌NO的影响。结果：毛蚶蛋白活性组分对多种人肿瘤细胞系有抑制作用，且呈作用时间与剂量依赖性；流式细胞术结合Giemsa染色发现，其主要引起HT-29细胞G2~M期阻滞，多核细胞增加，并具一定的诱导细胞凋亡作用；在50～100μg/mL下能刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7生长，增强其吞噬能力及NO分泌活性。结论：毛蚶蛋白活性组分具有一定抗肿瘤活性，主要机制为引起肿瘤细胞G2~M期阻滞及诱导其凋亡，且具一定免疫激活作用。
