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利用插入序列IS6110建立结核分枝杆菌检测方法的研究
目的 利用DNA聚合酶链式反应(PCR)扩增技术,建立一种敏感、特异的结核分枝杆菌检测方法,并探讨该方法在早期检测结核分枝杆菌中的应用价值.方法 以结核分枝杆菌特异性较好的插入序列IS6110基因片段为目的序列,设计一对特异性引物,对结核分枝杆菌H37Rv、大肠杆菌、肠炎沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌进行聚合酶链式反应扩增检测.结果 只有结核分枝杆菌H37Rv菌株经聚合酶链反应扩增后可见247 bp的特异性条带,其余5种非结核分枝杆菌菌株扩增产物经电泳后均未出现特异性条带.敏感性实验可检测出10 fg结核分枝杆菌DNA.结论 插入序列IS6110 DNA聚合酶链反应(PCR)是一种敏感、特异的结核分枝杆菌H37Rv的检测方法,为结核分枝杆菌的早期实验室检测提供了新的参考.
关键词： 结核分枝杆菌H37Rv 结核病 聚合酶链反应 敏感性 特异性 -
结核分枝杆菌H37Rv蛋白Rv2364c的表达纯化与生物信息学分析
目的 在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌H37Rv的Rv2364c蛋白,为研发抗结核分枝杆菌的药物提供材料.方法 PCR扩增目的基因Rv2364c.将PCR产物克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组原核表达质粒pET-28a-Rv2364c.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.表达产物经镍亲和层析柱纯化,并对该蛋白做生物信息分析.结果 双酶切和基因测序结果表明,成功构建了含有Rv2364c基因的重组表达质粒.SDS-PAGE结果显示,目的蛋白在大肠杆菌中得到了大量表达,经镍亲和层析柱纯化后目的蛋白的纯度达到了90%以上.生物信息学分析表明Rv2364c为稳定酸性蛋白,α-螺旋和无规卷曲为其主要二级结构元件,主要结构域类型有Era结构域和KH结构域两种.结论 成功表达和纯化了Rv2364c蛋白,并利用生物信息学方法初步预测其结构域等,为进一步研究Rv2364c在结核病发生发展中的作用奠定了基础.
关键词： 结核分枝杆菌H37Rv Rv2364c 转染 生物信息分析
