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人肝细胞核因子-1β基因cDNA全长的克隆与表达
目的 构建人肝细胞核因子-1β (hHNF-1β)基因cDNA全长的原核表达质粒[pET-28a(+)-hHNF-1β]并在大肠杆菌(E.Coli)中高效表达.方法 提取正常成人肝脏组织的总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收,构建克隆载体pMD-HNF-1β,设计带酶切位点BamHⅠ和Hind Ⅲ的引物,PCR后酶切连入pET-28a(+)中,转化DE3,测序后IPTG诱导表达,Western blot检测其特异表达,并对重组hHNF-1β(rhHNF-1β)诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化.结果 测序证实所得的hHNF-1β cDNA序列与其在GenBank中的序列一致,重组质粒pET-28a(+)-hHNF-1β的双酶切结果与预期大小完全一致.IPTG诱导的佳浓度是0.04 mmol/L,时间为6 h,温度为37℃.结论 成功克隆和构建了hHNF-1β基因的原核表达载体并对诱导表达的条件进行了优化,为进一步的功能分析奠定基础.
关键词： 肝细胞核因子-1β pET-28a(+) 高效表达 包涵体 -
ER、HNF-1β及COX-2在子宫内膜异位相关性卵巢癌中的表达及临床意义
目的 探究雌激素受体(ER)、肝细胞核因子Iβ(HNF-1β)以及环氧化酶-2(COX-2)在不同类型子宫内膜异位相关性卵巢癌(EAOC)中的表达差异.方法 选取2011年7月至2016年4月苏州大学附属第二医院收治的EAOC患者44例,其中子宫内膜样癌17例,透明细胞癌21例,卵巢浆液性癌6例.采用免疫组织化学法检测ER、HNF-1β及COX-2在不同类型EAOC中的表达差异,并采用Spearman秩相关分析探讨三者表达水平的相关性.结果 ER在子宫内膜样癌患者中的阳性率为100.0％,显著高于透明细胞癌患者的9.5％和卵巢浆液性癌患者的0％(x2=4.305,P＜0.01),而HNF-1β在透明细胞癌和卵巢浆液性癌患者中的阳性率分别为85.7％和100.0％,显著高于子宫内膜样癌患者的11.8％(x2 =3.585,P＜0.01),COX-2在子宫内膜样癌、透明细胞癌和卵巢浆液性癌患者中的阳性率分别76.5％、81.0％、83.3％,差异无统计学意义(x2=0.744,P=0.104).ER和HNF-1β的表达水平呈负相关(r=-0.428,P＜0.01),与COX-2的表达水平呈正相关(r=0.204,P=0.013).结论 ER主要在子宫内膜样癌中表达,HNF-1β主要在透明细胞癌和卵巢浆液性癌中表达,ER的表达水平与HNF-1β及COX-2的表达水平具有一定的相关性.
