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ADAMTS-1对小鼠成纤维细胞转化生长因子及其下游信号通路PI3K/AKT的影响
目的 探索含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)对体外小鼠成纤维细胞(NIH3T3)转化生子因子(TGF-β1)及其下游信号通路磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)的影响.方法 体外培养小鼠成纤维细胞,以ADAMTS-1为处理因素,按照不同浓度,将NIH3T3分为空白组、低浓度组(1 nM)、中浓度组(10 nM)、高浓度组(20 nM),通过RT-PCR检测细胞TGF-β1mRNA的表达情况,利用Western-blot观察细胞TGF-β1及磷酸化蛋白激酶B(pAKT)的蛋白表达情况.结果 根据RT-PCR图像显示,与空白组相比,其他各组TGF-β1mRNA的表达均下降,且随着浓度的增高,呈逐渐降低趋势(P<0.05).根据Western-blot图像显示,与对照组相比,其他各组TGF-β1、pAKT的蛋白表达均下降,且随着浓度的增高,呈逐渐降低趋势(P<0.05).结论 ADAMTS-1可能下调TGF-β1及其下游PI3K/AKT信号通路.
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五福饮对大鼠尾部退变椎间盘的影响及其作用机制
目的:观察五福饮对大鼠尾部退变椎间盘的影响及其作用机制.方法:将48只12周龄健康雄性清洁级SD大鼠随机分成空白对照组、模型组、五福饮组,每组16只.针刺模型组、五福饮组大鼠尾部椎间盘并向椎间盘内注入肿瘤坏死因子-α,空白对照组大鼠不做任何处理.造模成功后(造模开始后4周)五福饮组以20 mL·kg-1剂量的五福饮灌胃,空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,每日1次,连续灌胃8周.分别于造模成功后及药物干预8周后从各组随机抽取8只大鼠,采用麻醉过量法处死后,完整取下Co5～6椎间盘及其相邻两侧椎体,行Micro-CT扫描测量椎间相对高度,采取HE染色观察椎间盘组织形态,采用逆转录-聚合酶链式反应法检测椎间盘β-连环蛋白(β-catenin)和含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(a disintesrin and metalloprotease with thrombospondin typeⅠmotifs,ADAMTS)-5基因的表达.结果:①椎间隙相对高度.造模成功后,3组大鼠Co5～Co6椎间隙相对高度比较,差异有统计学意义[100％,(56.37±11.32)％,(55.63±12.76)％,F=22.148,P=0.000];空白对照组Co5～Co6椎间隙相对高度高于模型组和五福饮组(P=0.000,P=0.000);模型组Co5～Co6椎间隙相对高度与五福饮组比较,差异无统计学意义(P=0.203).药物干预8周后,3组大鼠Co5～Co6椎间隙相对高度比较,差异有统计学意义[100％,(50.35±10.72)％,(80.84±9.43)％,F=31.492,P=0.000];空白对照组Co5～Co6椎间隙相对高度高于模型组和五福饮组(P=0.000,P=0.000),模型组Co5～Co6椎间隙相对高度低于五福饮组(P=0.001).②椎间盘组织形态.造模成功后,模型组和五福饮组大鼠Co5～6椎间盘均明显退变,表现为髓核细胞数量减少,纤维环排列紊乱且出现裂隙,纤维环与髓核交界区变窄.药物干预8周后,模型组大鼠Co5～6椎间盘退变更明显,而五福饮组大鼠Co5～6椎间盘退变情况明显改善,可见较多髓核细胞,细胞排列尚均匀,纤维环胶原走向清楚,纤维环与髓核交界区较宽.③椎间盘组织β-catenin基因的表达.造模成功后,3组大鼠Co5～6椎间盘组织β-catenin基因表达量比较,差异有统计学意义(1.32±0.21,2.87±0.41,2.73±0.42,F=18.806,P=0.001);空白对照组Co5～6椎间盘组织β-catenin基因表达量低于模型组和五福饮组(P=0.000,P=0.001);模型组Co5～6椎间盘组织β-catenin基因表达量与五福饮组比较,差异无统计学意义(P=0.457).药物干预8周后,3组大鼠Co5～6椎间盘组织β-catenin基因表达量比较,差异有统计学意义(1.01±0.17,2.64±0.33,1.51±0.31,F=26.616,P=0.000);空白对照组Co5～6椎间盘组织β-catenin基因表达量低于模型组和五福饮组(P=0.000,P=0.002),模型组Co5～6椎间盘组织β-catenin基因表达量高于五福饮组(P=0.001).④椎间盘组织ADAMTS-5基因的表达.造模成功后,3组大鼠Co5～6椎间盘组织ADAMTS-5基因表达量比较,差异有统计学意义(1.18±0.14,2.34±0.25,2.42±0.28,F=47.786,P=0.000);空白对照组Co5～6椎间盘组织ADAMTS-5基因表达量低于模型组和五福饮组(P=0.000,P=0.000);模型组Co5～6椎间盘组织ADAMTS-5基因表达量与五福饮组比较,差异无统计学意义(P=0.530).药物干预8周后,3组大鼠Co5～6椎间盘组织ADAMTS-5基因表达量比较,差异有统计学意义(1.21±0.27,2.45±0.29,1.38±0.13,F=6.053,P=0.022);空白对照组和五福饮组Co5～6椎间盘组织ADAMTS-5基因表达量低于模型组(P=0.000,P=0.027);空白对照组Co5～6椎间盘组织ADAMTS-5基因表达量与五福饮组比较,差异无统计学意义(P=0.205).结论:五福饮可缓解大鼠尾部椎间盘组织退变,恢复椎间隙相对高度,其作用机制可能与其能下调椎间盘组织中β-catenin和ADAMTS-5的表达有关.
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ADAMTS-1对小鼠肺成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响
目的 探讨含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)对小鼠肺成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白(COL1)表达的影响及可能的机制.方法 应用细胞培养技术进行小鼠肺成纤维细胞培养,利用ADAMTS-1为刺激因子,将培养的细胞分为空白组、低、中、高浓度组,应用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察COL1 mRNA、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA在各组中的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western blotting)观察各组细胞COL1、TGF-β1的变化.结果 与空白组相比,低浓度组、中浓度组、高浓度组的COL1、TGF-β1表达水平下降,其中高浓度组表达水平低(P＜0.05).结论 ADAMTS-1能降低COL1的表达,抑制TGF-β1是其抗纤维化作用的可能潜在机制.
