首页 > 文献资料
-
组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合伊马替尼对K562细胞的协同杀伤作用
目的:观察组蛋白去乙酰化酶( HDAC)抑制剂SAHA联合伊马替尼(imatinib,IM)对人慢性髓系白血病(CML)细胞株的协同杀伤作用,并探讨其分子学机制.方法:将不同浓度的SAHA和IM分别或联合作用于对数生长期的K562细胞,MTT比色法检测药物对细胞的生长抑制作用；应用Hoechst荧光染色法和流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡,Western blot法检测药物处理后Bcr-Abl及其下游信号途径蛋白的表达、Caspase途径活化和凋亡相关蛋白表达的改变.结果:SAHA和IM单独作用K562细胞呈剂量依赖性抑制细胞生长(SAHA:F=433.8,P＜0.001；IM:F =54.14,P＜0.001)；两药联合对细胞的生长有协同杀伤作用,联合指数CI＜1.FACS分析和Hoechst荧光染色证实,SAHA和IM两药联合能加速K562细胞的凋亡,激活Caspase-3、Caspase-8和PARP,下调抗凋亡蛋白Mcl-1表达.此外,SAHA和IM联用能抑制Bcr-Abl及其磷酸化水平,下调JAK2和磷酸化STAT5表达.结论:HDAC抑制剂SAHA联合IM能协同杀伤CML细胞、加速细胞凋亡.其作用机制可能是两药联用协同抑制了Bcr-Abl及其磷酸化水平,抑制JAK2/STAT5信号途径和下调下游靶基因Mcl-1.
-
SDF-1/CXCR4轴在骨髓基质细胞共培养介导K562细胞伊马替尼耐药的作用研究
目的 构建慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞-K562细胞共培养模型,观察慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞共培养对K562细胞伊马替尼敏感性的影响,并探讨基质细胞衍生因子1(SDF-1)/趋化因子受体4(CXCR4)轴在伊马替尼耐药形成中的作用.方法 从慢性髓细胞白血病患者骨髓分离、培养骨髓基质细胞,与K562细胞共培养构建慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞-K562细胞共培养模型.将K562细胞暴露于0.5μmol/L伊马替尼72 h,流式细胞术检测K562细胞凋亡率及CX-CR4表达.将0.5μmol/L伊马替尼作用4h并以Calckin-AM荧光标记的K562细胞接种于基质细胞层培养24 h,去除悬浮细胞,收集黏附的K562细胞通过检测荧光强度计算细胞黏附率.以10 μg/ml的CXCR4单克隆抗体12G5阻抑SDF-1/CXCR4轴,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测伊马替尼IC50.结果 0.5μmol/L伊马替尼处理72 h,悬浮组及骨髓基质细胞共培养组K562细胞凋亡率分别为(15.48 ±4.17)％及(32.01 ±6.83)％,两组比较差异有统计学意义(t=5.587,P=0.001).悬浮组伊马替尼作用前后K562细胞CXCR4表达阳性率分别为(11.28±3.44)％及(25.34±3.21)％,其差异有统计学意义(t=5.863,P=0.001);共培养组伊马替尼作用前后K562细胞CXCR4表达阳性率分别为(20.31±3.76)％及(53.64±5.35)％,其差异有统计学意义(t=5.959,P=0.001).0.5μmol/L伊马替尼作用4h使K562细胞与骨髓基质细胞的黏附率由(42.18±6.17)％提升至(68.97±11.08)％(t=2.468,P=0.027).以10 μg/ml的CXCR4抗体12G5阻抑SDF-1/CXCR4轴后共培养组IC5o为(0.68±0.04)μmol/L,与未加抗体对照组(1.27±0.05) μmol/L比较,差异有统计学意义(t=4.869,P=0.001).结论 慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞共培养能介导K562细胞对伊马替尼耐药,其机制可能与基质细胞共培养及伊马替尼诱导K562细胞CXCR4的表达有关,阻抑SDF-1/CXCR4信号轴可在一定程度上逆转骨髓微环境介导的伊马替尼耐药.
-
酪氨酸激酶抑制剂治疗慢性髓性白血病进展及临床应用
慢性髓性白血病(CML)在血液系统恶性肿瘤中占较高比例,而近10年来酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)的出现及发展改变了CML的治疗理念.TKIs通过抑制激酶的自磷酸化和下游的信号转导从而达到抗肿瘤目的.近年来,国内外许多大型的医疗机构正在不断进行TKIs的临床实验研究,深入了解TKIs的研究进展及在CML治疗中如何选择TKIs,对临床治疗CML有极大意义.
