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7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素上调miR-26b对妊娠期糖尿病脂肪细胞葡萄糖摄取的影响
目的 探究7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4'-dimethoxygenistein,DFMG)对妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)肠系膜脂肪细胞摄取葡萄糖的影响.方法 提取GDM孕妇肠系膜脂肪细胞,MTT检测不同浓度DFMG对脂肪细胞的毒性;液体闪烁仪检测脂肪细胞对[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖的摄取率;RT-PCR检测孕妇肠系膜脂肪细胞miR-26b及其下游靶基因PTEN mRNA表达变化;Western blotting检测IRS-PI3K/AKT-mGLUT4信号通路相关蛋白的表达.结果 DFMG对体外培养GDM孕妇肠系膜脂肪细胞无毒副作用,与GDM组相比,液体闪烁仪提示DFMG可显著促进GDM肠系膜脂肪细胞对[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖的摄取率(P＜0.05). RT-PCR提示DFMG可以显著上调GDM脂肪细胞miR-26b表达(P＜0.05),下调PTEN mRNA表达∽＜0.05).Western blotting提示DFMG可以下调PTEN蛋白表达(P＜0.05),上调p-PI3K、p-AKT和mGLUT4蛋白表达(尸＜0.05).结论 DFMG可能通过上调miR-26b表达,调节IRS-PI3K/AKT-GLUT4信号通路,调节GDM肠系膜脂肪细胞对葡萄糖的摄取率.
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7-二氟亚甲基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素拮抗高糖诱导视网膜微血管内皮细胞损伤的浓度效应
目的 探讨7-二氟亚甲基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethyl-5,4'-dimethoxygenistein,dFMGEN)拮抗高糖诱导猴视网膜微血管内皮细胞(retinal capillary endothelial cells,RCEC)损伤的浓度效应.方法 用不同浓度的dFMGEN和金雀异黄素(genistein,GEN)作用于高糖损伤的猴RCEC.测定各组乳酸脱氢酶活性,MTT法测定细胞增生抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡率,观察不同浓度的dFMGEN及FEN拮抗高糖诱导RCEC损伤的浓度效应关系.结果 3.0 μmol·L-1和10.0 μmol·L-1dFMGEN组及GEN组细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性分别为(106.600±1.172)U·L-1、(96.900±1.677)u·L-1、(99.400±1.113)U·L-1,细胞增生抑制率分别为29.9%、27.3%和29.1%,细胞凋亡率为(20.20±2.35)%、(9.27±1.30)%、(12.80±4.43)%,与高糖损伤组比较差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 dFMGEN能拮抗高糖诱导体外培养的RCEC损伤,并且在一定程度上较其先导化合物GEN所需的浓度低而作用更明显,这种拮抗作用呈明显的浓度依赖性.随浓度的提高作用越明显.
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DFMG调节TLR4信号通路对氧化损伤的内皮细胞诱导巨噬细胞增殖的影响
目的:观察7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(DFMG)对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)诱导的THP-1(人单核细胞系)源性巨噬细胞(MΦ)增殖的影响及探索其可能的发生机制.方法:制备溶血性磷脂酰胆碱(LPC)氧化损伤HUVE-12与MΦ 共培养模型,浓度梯度DFMG、TLR4特异性拮抗剂(CLI-095)、TLR4特异性激动剂(LPS)干预LPC氧化损伤HUVE-12与MΦ 共培养;MTT法观察MΦ 的增殖;western blot检测HUVE-12 TLR4蛋白的表达水平.结果:LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞增殖,DFMG抑制LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖,上调TLR4表达进一步促进LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖,下调TLR4表达抑制LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖.结论:DFMG可能通过下调LPC氧化损伤HUVE-12的TLR4蛋白表达水平,抑制炎症反应,从而抑制巨噬细胞增殖.
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7-二氟亚甲基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素对大鼠压力性尿失禁模型的疗效及其机制
目的:探讨7-二氟亚甲基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethy-5,4'-dimethoxygenistein,DFMG)对SD大鼠压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)模型的疗效及其机制.方法:采用模拟妊娠、难产产伤及卵巢去势建立SD大鼠SUI模型,分为正常对照组、SUI组、DFMG(10,20mg/kg)组,模型鼠行DFMG隔日灌胃治疗.采用膀胱大容积(maximal bladder capacity,MBC)、漏尿点压力(leak point pressure,LPP)、腹部漏尿点压力(abdominal leak pointpressure,ALPP)以及HE染色和Masson染色检测建模效果;采用RT-PCR检测尿道括约肌细胞(urethral sphincter muscles cells,USMCs)miR-26b及其下游靶基因磷酸酶和肌腱同源染色体(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PENT)mRNA表达;用Western印迹检测USMCs细胞PENT,磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K),蛋白激酶B(protein kinaseB,AKT),B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax),细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase-9)的蛋白表达;采用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测USMCs细胞凋亡率,采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]检测尿USMCs细胞增殖率.结果:成功建立SD大鼠SUI模型.HE染色和Masson染色显示:与SUI组比较,DFMG组尿道括约肌病理症状显著改善,MBC,LPP和ALPP均有显著提高(均P＜0.05).RT-PCR结果显示:与SUI组比较,DFMG组USMCs细胞miR-26b mRNA表达升高(P＜0.05),PENT mRNA表达下调(P＜0.05).Western印迹显示:与SUI组比较,DFMG组PENT,Bax,Cyt-C和caspase-3蛋白均下调(均P＜0.05);而PI3K,AKT和Bcl-2蛋白表达均上调(均P＜0.05);并伴随USMCs细胞凋亡率降低(P＜0.05),增殖率增高(P＜0.05).结论:DFMG可以显著改善SUI模型鼠尿动力学症状,其机制可能与上调miR-26b表达、调控PI3/AKT-Bcl-2/Bax信号通路而抑制细胞凋亡有关.
