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多西环素对小细胞肺癌H446细胞增殖及HIF表达的影响
目的 探讨多西环素对小细胞肺癌H446细胞增殖及HIF-1α和HIF-2α表达的影响.方法 采用MTT法检测多西环素对H446细胞增殖抑制作用.采用倒置相差光学显微镜观察多西环素对细胞凋亡形态的影响.通过流式细胞仪合并CellFit软件对细胞周期分布进行分析,采用Annexin Ⅴ-FITC荧光染色检测细胞凋亡率.采用细胞健康分析软件检测细胞内线粒体膜电位.实时荧光定量PCR检测HIF-1α和HIF-2α表达.Western blot法检测凋亡相关蛋白表达.结果 多西环素(2.5、5、10、20、40、80 mg/L作用24或48小时)呈剂量-时间依赖性抑制H446细胞增殖.经光学显微镜可明显观察到多西环素能导致H446细胞凋亡,呈时间-剂量依赖性.流式细胞仪结果显示,10、20、40 mg/L多西环素作用48小时能阻滞H446细胞周期S期,并且随着细胞凋亡率增加,呈剂量依赖性.浓度为10、20、40 mg/L多西环素作用48小时的细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);经10、20、40 mg/L多西环素作用48小时的细胞HIF-1 α、HIF-2α mRNA表达均低于对照组(均P＜0.05),HIF-1α 、HIF-2d蛋白表达量低于对照组,且HIF-1 α和HIF-2α变化趋势均相同,随着多西环素浓度增加、表达量降低(P＜0.05).结论 多西环素对小细胞肺癌H446细胞具有增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,可阻滞细胞于S期,降低线粒体膜电位,下调HIF-1α、和HIF-2d蛋白表达,且伴随有H446细胞凋亡的现象.
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多西环素对兔膝关节骨关节炎软骨及滑膜中MMP-3和TIMP-1 mRNA表达的影响
目的 探讨多西环素对骨关节炎软骨退变的保护机制,为临床防治退行性骨关节病、治疗创伤性骨关节炎提供实验依据.方法 (1)模型制作:成年新西兰大白兔16只,行右侧膝关节前交叉韧带切断术(ACLT),术后不固定右膝关节.分笼饲养,每笼1只.予以青霉素(40万单位)肌注预防感染,1次/d,注射3d.术后第4天,驱赶实验动物以强制膝关节活动,每天60 min,持续30d.术后4周,右膝关节创伤性关节炎模型建立完成.(2)动物分组:将动物随机分为两组,每组8只,实验组注射多西环素[1.33％多西环素溶液0.3 ml(总量0.4 mg)],对照组注射生理盐水(0.3 ml),所有动物均分笼饲养,不再强制活动.总共注射时间为4周.(3)采集标本及数据分析:用空气栓塞的方法处死所有实验动物,采集髌骨关节面软骨及关节内滑膜标本,应用Brittberg软骨退变分级标准进行大体评分.用RT-PCR的方法检测MMP-3 mRNA及TIMP-1 mRNA的表达.结果 大体评分显示实验组髁软骨评分0级6例,1级2例,髌软骨评分0级5例,1级3例.对照组髁软骨退变程度较轻,髌软骨评分0级2例,1级6例.实验组和对照组中,在术后8周都有MMP-3 mRNA及TIMP-1mRNA的表达.实验组MMP-3 mRNA表达(1.20 ±0.32)较对照组(1.97±0.54)明显降低(t=3.47,P＜0.05),而实验组中TIMP-1 mRNA表达(3.22±0.42)较之对照组(1.90±0.33)有显著缯强(t=6.99,P＜0.01),两者比较差异均有统计学意义.结论 关节内注射多西环素后,抑制了关节软骨和滑膜中MMP-3 mRNA的表达、上调TIMP-1 mRNA的表达,从而减轻关节软骨退变程度.
