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缺失激素结合区的人糖皮质激素受体突变体的研究
目的:构建缺失激素结合区(LBD)的人糖皮质激素受体突变体表达载体,并研究其表达和功能.方法:运用RT-nested PCR扩增人糖皮质激素受体(GR)基因不含编码LBD的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选编码正确的重组质粒;荧光显微镜观察GR突变体重组质粒转染人巨噬细胞株U937后的表达情况;相对荧光素酶法检测转染后细胞GR转录激活活性.结果:扩增出长1601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genebank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞GR转录激活活性增强.结论:成功构建缺失LBD的GR突变体表达载体,该突变体具有不依赖激素的GR转录激活活性.
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前列腺癌患者雄激素受体N端区的突变研究
雌激素受体(androgen receptor, AR)由N端区、居中的DNA结合区和C端的激素结合区组成.N端区约由550个氨基酸组成,占AR的一半以上,其中第100~485位氨基酸与受体的转录活化功能(activation function, AF)有关,因此被称为AF1区,该区的缺失几乎可使AR的转录激活功能全部丧失,因而是AR充分发挥其转录激活功能所必需.国外研究表明AR的AF1区的基因突变是前列腺癌(prostate cancer, PC)发展和内分泌治疗抵抗的原因之一,但国内尚未见这方面的研究报道.目的:确定正常中国人AR N端AF1区的核苷酸顺序.在此基础上,检测PC患者癌组织中AR的AF1区突变,以探讨AF1区与PC进展的关系.方法:用4对引物(A3~A6)PC0例中国正常男性外周血中AR的AF1,双链DNA循环测序以确定正常中国人AR的AF1的核苷酸顺序.用PCR-SSCP(单链构象多态性)-DNA双链循环测序法对42例(低分化腺癌19例,中分化腺癌12例,高分化腺癌11例)PC患者石蜡切片癌组织中AR的AF1区进行突变检测.结果:正常中国人AR N端AF1的序列与欧美报道的完全一致.在3例低分化PC患者石蜡切片组织中(PC28、PC29、PC35)的AF1区各发现一错义突变(Gly 142 Val、 Asp221 His和Ser 296 Arg).结论:正常中国人AR的AF1序列与欧美人无差别.中国人PC组织中存在AR N端AF1区的突变,在AF1区发现的3种新突变AR均位于低分化PC患者中,提示AR的突变可能与PC的进展有关.