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Cyclin D3、CDK11p58在脂多糖诱导大鼠星形胶质细胞活化过程中的表达及相互作用
目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导星形胶质细胞活化过程中细胞周期蛋白D3(cyclin D3)、周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)11p58 的表达、亚细胞定位及相互作用.方法:LPS 刺激体外培养大鼠星形胶质细胞,采用Western Blot 技术检测过程中cyclin D3 及CDK11p58 蛋白的表达情况;用免疫共沉淀技术分析LPS刺激前后cyclin D3 及CDK11p58 形成复合物的情况;用免疫荧光双标技术检测二者的亚细胞定位情况;将cyclin D3 真核表达载体转染入星形胶质细胞,用核浆分离技术分析过表达cyclin D3 对于CDK11p58 亚细胞定位影响.结果:LPS 呈浓度依赖性上调星形胶质细胞内cyclin D3 及CDK11p58 蛋白表达;cyclin D3 与CDK11p58 可形成复合物,LPS 刺激增强二者相互作用;静息状态下星形胶质细胞内cyclin D3 及CDK11p58 均主要位于细胞核,但在细胞质内亦有不同程度表达,LPS 刺激后二者均向细胞核聚集,且出现明显细胞核内共定位; 过表达cyclin D3 可促进CDK11p58 向细胞核转运.结论:LPS 可刺激大鼠星形胶质细胞内cyclin D3 及CDK11p58 蛋白表达;cyclin D3 通过与CDK11p58 相互作用,促进CDK11p58 细胞核转运,从而参与星形胶质细胞活化过程.
关键词： 星形胶质细胞 细胞周期蛋白D3 周期蛋白依赖性激酶11p58 脂多糖 -
人类细胞周期蛋白D3反义表达质粒的构建
目的:构建人类细胞周期蛋白D3(cyclin D3)反义表达质粒,为今后利用反义核酸阻断技术研究cyclinD3基因的功能提供基础.方法:运用DNA重组技术将人cyclin D3基因反向克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建成cyclin D3反义表达质粒pcDNA3-ascyclin D3.结果:通过酶切鉴定及测序分析证实,实验成功构建了人cyclin D3反义表达质粒.结论:cyclin D3反义表达质粒pcDNA3-ascyclin D3的成功构建,为进一步研究cyclin D3的生物学功能及其在肿瘤发生、发展、诊疗和预后中的作用奠定了基础.
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Cyclin D3与肿瘤的研究进展
细胞周期的失调在肿瘤的发生发展过程中起着关键性作用.细胞周期蛋白D(Cyclin D)是G1/S期转换的重要正性调控因子,包括3个亚型:Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3.已证实Cyclin D1是1种原癌基因,其基因结构和功能异常与多种肿瘤(如乳腺癌、食管癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤等)的发生发展密切相关[1].Cyclin D2在胃癌、结直肠癌、骨肉瘤、慢性B细胞淋巴细胞白血病等肿瘤中发现有异常表达[2].近几年来,另1种D类细胞周期蛋白-Cyclin D3的失调在肿瘤发病过程中的作用越来越受到广大研究者的重视,成为肿瘤遗传学、肿瘤病因学等众多领域的1个新的研究热点.现对Cyclin D3与肿瘤关系的研究进展做一综述.
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Cyclin D3、Cyclin D1、p27KIP1在膀胱尿路上皮细胞癌中的表达及其关系
目的 探讨膀胱尿路上皮细胞癌(UCCB)组织中Cyclin D3、Cyelin D1和p27KIP1的表达及关系.方法 采用免疫组织化学方法测定50例UCCB组织、癌旁组织及15例正常膀胱黏膜组织的Cyelin D3、Cyelin DI和p27KIP1表达情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定CyclinD3 mRNA的表达情况.结果 Cyclin D3蛋白在UCCB、癌旁黏膜及正常膀胱黏膜中的表达率分别为32.00%(16/50)、12.00%(6/50)和6.67%(1/15),在UCCB组织中的表达高于癌旁黏膜和正常膀胱黏膜中的表达,差异有统计学意义(P<0.05),和病理分级、肿瘤大小及1年内肿瘤复发明显相关(P<0.05);Cyelin D3 mRNA在膀胱癌组织与癌旁组织和正常组织间,差异均有统计学意义(P<0.01).CycLin D1阳性率为80.00%(40/50),和病理分级及1年内肿瘤复发明显相关(P<0.05);p27KIP1阳性率为46.00%(23/50),和病理分级及1年内肿瘤复发明显相关(P<0.05).p27KIP1蛋白与Cyclin D3蛋白、Cyefin D1蛋白在UCCB中的表达呈负相关(r=-0.5472,P<0.01:r=-0.5417,P<0.01).Cyelin D3和Cyclin D1蛋白表达呈正相关(r=0.3430,P(0.05).结论 UCCB组织中Cyclin D3、Cyclin D1和p27KIP1表达明显相关,三者联合检测对UCCB的诊断治疗和估计预后有一定意义.
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人Cyclin D3基因启动子区的分子克隆及在A2780细胞中的功能分析
目的 对Cyclin D3启动子的结构和功能进行分析.方法 用PCR的方法扩增不同长度的Cyclin D3启动子片段.将PCR产物克隆入荧光素酶报道载体pGL3-Basic Vector,构建含有Cyclin D3启动子片段的重组子pD3-△.双荧光素酶报道系统检测重组子pD3-△在A2780细胞中的启动子活性,筛选关键转录调控区域.TFSEARCH l.3 v分析该区域,结合文献复习筛选可能的转录因子.结果 用PCR方法扩增出了不同长度的Cyclin D3启动子片段.上述片段克隆到pGL3-Basic中,构建了重组子pD3-△.双荧光素酶报道系统发现在Cyclin D3启动子上游-1044 bp至-766 bp之间、-362 bp至-197 bp之间,分别存在一个正性调控区域.-766 bp至-551 bp之间存在一负性调控区域.TFSEARCH发现在上述调控区中存在C/EBP、SP1、AP1、HSF和MZF1等转录因子的结合基序.结论 在Cyclin D3启动子片段上游-1044 bp至-766 bp之间、-362 bp至-197 bp之间,分别存在一个正性调控区域;-766 bp和-551 bp之间存在一负性调控区域.转录因子C/EBP、SP1、AP1、HSF和MZF1等可能在Cyclin D3的转录调控中发挥重要作用.
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藤黄酸抑制NF-кB信号通路阻滞Raji细胞周期进程
目的 探讨藤黄酸对人B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞系Raji细胞周期的影响及可能的信号通路.方法 采用碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期.免疫印迹检测Cyclin D3、Cyclin E和NF-кB蛋白表达.结果 藤黄酸能明显抑制Raji细胞增殖,呈剂量依赖性阻滞Raji细胞周期于G0/G1.期,下调Cyclin D3、Cyclin E和NF-кB蛋白表达.结论 藤黄酸通过抑制调节Cyclin D3和Cyclin E的表达,阻滞细胞周期进程,该过程可能与NF-кB传导通路有关.
