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肿瘤坏死相关凋亡诱导配体对前列腺癌及膀胱癌细胞增殖、凋亡的作用
目的：研究重组并纯化的肿瘤坏死因子凋亡诱导配体（ TRAIL）蛋白对前列腺癌及膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响。方法：将不同浓度的TRAIL蛋白与培养的前列腺癌细胞（ PC-3细胞）和膀胱癌细胞（5637细胞）共孵育24 h后，采用细胞增殖实验及流式细胞术检测肿瘤细胞的增殖及凋亡。结果：PC-3细胞株中，与未处理组比较，TRAIL蛋白浓度在20、40、80、160 ng · ml －1时细胞增殖率均有显著性差异；而在5637细胞株中，与未处理组比较，TRAIL蛋白浓度在5、10、20、40 ng · ml －1时细胞增殖率均有显著性差异。流式细胞实验结果也证实，随TRAIL蛋白浓度的增高，两种肿瘤细胞凋亡率增加。结论：重组并纯化TRAIL蛋白可通过抑制前列腺癌及膀胱癌细胞的增殖，诱导其凋亡而产生抗肿瘤的作用。
关键词： 肿瘤坏死因子凋亡诱导配体 前列腺癌 膀胱癌 增殖 凋亡 -
肿瘤坏死因子凋亡诱导配体联合顺铂对人横纹肌肉瘤细胞株凋亡的影响
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白及TRAIL基因和顺铂联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用,并分析细胞线粒体膜电位和细胞内cFLIP mRNA表达的改变对凋亡的的影响.方法 将TRAIL蛋白、TRAIL基因和顺铂作用于培养的人横纹肌肉瘤细胞,通过MTT比色法、流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡和线粒体跨膜电位的改变、RTPCR检测cFLIPmRNA表达,观察和分析TRAIL蛋白及TRAIL基因单独对横纹肌肉瘤细胞的作用及和顺铂联合作用的效果和机制.结果 TRAIL基因和100 μg/L的TRAIL蛋白对横纹肌肉瘤细胞的生长抑制率分别为52.5%和43.5%,凋亡诱导率为12.95%和10.26%,联合应用顺铂,生长抑制率和凋亡诱导率均显著高于单独应用,FCM分析显示联合应用降低了线粒体跨膜电位,RT-PCR显示cFLIP mRNA表达下降,与联合应用细胞凋亡率增加相一致.结论 TRAIL蛋白和TRAIL基因能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长,联合应用顺铂可显著提高疗效.
关键词： 横纹肌肉瘤 肿瘤坏死因子凋亡诱导配体 顺铂 -
吴茱萸碱抑制Huh7细胞生长并增强细胞对TRAIL的敏感性
目的:探讨吴茱萸碱对人肝癌Huh7细胞生长和凋亡的影响,阐明吴茱萸碱促进肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)抗肿瘤活性的分子机制.方法:MTT 法检测吴茱萸碱对Huh7细胞活力的影响;流式细胞术观察吴茱萸碱对细胞周期的阻滞;TUNEL染色法检测细胞凋亡的变化;Western blot实验测定细胞内细胞周期和凋亡相关蛋白的表达水平.结果:Huh7细胞经吴茱萸碱处理后,细胞活力明显下降(P<0.05);同时,细胞发生G2/M期阻滞,p27、cyclin B1、细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)和p-Cdc2的蛋白水平上调(P<0.05);吴茱萸碱能够诱导Huh7细胞发生凋亡,促进多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和caspase-3的切割.当吴茱萸与TRAIL联用后,Huh7细胞活力明显下降,PARP和caspase-3的切割增加;另外,吴茱萸上调Huh7细胞中死亡受体5(DR5)的蛋白水平.结论:吴茱萸碱通过抑制细胞活力和阻滞细胞周期于G2/M期而抑制细胞生长,并诱导Huh7细胞发生凋亡;上调DR5的表达水平可能与吴茱萸碱增强Huh7细胞对TRAIL的敏感性相关.
关键词： 吴茱萸碱 细胞周期 细胞凋亡 肿瘤坏死因子凋亡诱导配体 死亡受体5 -
线粒体途径在肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导结肠癌细胞凋亡中的调节作用
目的 探讨线粒体途径在肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导结肠癌细胞凋亡过程中的调节作用,为临床合理用药提供理论指导.方法 采用流式细胞仪技术、荧光显色技术和Western印迹技术检测TRAIL处理结肠癌细胞SW1116后,在不同时间细胞凋亡情况、线粒体完整性改变(△ψm、cardiolipin情况)以及线粒体下游通路细胞色素C和Caspase-9的表达情况.结果 TRAIL诱发结肠癌细胞凋亡,于4 h达凋亡高峰,凋亡指数为32.98%;在4 h出现线粒体△ψm下降和cardiolipin丢失增加,造成其内膜损伤;细胞色素C表达及Caspase-9酶活性随时间的延长而增加,24 h酶活性达到大峰值为(48.12±2.21)μmol·L-1·h-1·mg-1蛋白.TRAIL诱导的线粒体损伤可被Caspase抑制剂Z-VAD.fmk所抑制.结论 线粒体途径参与TRAIL诱导结肠癌细胞的凋亡过程,以Caspase依赖方式引发线粒体△ψm和eardiolipin丢失,造成内膜损伤,导致细胞色素C释放和Caspase-9激活,诱发凋亡.
关键词： 线粒体途径 肿瘤坏死因子凋亡诱导配体 内膜损伤 结肠肿瘤 细胞凋亡 -
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对乙型肝炎病毒启动子的调控作用
目的 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能够诱导乙型肝炎病毒(HBV)感染细胞发生凋亡,但抑制病毒复制的具体机制不清楚,研究通过非凋亡浓度TRAIL对4种HBV启动子调控作用的研究,探讨HBV复制的可能调控机制.方法 采用噻唑蓝法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记荧光法,检测不同浓度TRAIL作用后人肝癌细胞株HepG2的存活率.使用HBV的4种启动子重组质粒,4种启动子分别控制乙肝表面抗原、X抗原、核心抗原、PS1抗原基因的转录与表达.将受HBV上述4种启动子调控的荧光素酶报道基因表达质粒(SpLUC、XpLUC、CpLUC、PS1pLUC)转染HepG2细胞,6h后按300、30、3 ng/mL浓度梯度加入可溶性TRAIL,采用双荧光报道基因分析系统检测细胞化学发光值,计算相对荧光素酶活性.结果 300 ng/mL是可溶性TRAIL诱导HepG2细胞凋亡的浓度阈值.采用远低于凋亡阈值浓度(30 ng/mL)的TRAIL可明显上调对HBV的Sp启动子活性(P＜0.001),另3种质粒的相对荧光素酶活性在加入TRAIL后改变不大.结论 TRAIL仅对HBV的Sp启动子活性具有上调作用,其生物学意义值得进一步研究.
关键词： 肿瘤坏死因子凋亡诱导配体 乙型肝炎病毒 自身启动子 相对荧光素酶活性
