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小鼠念珠菌性阴道炎中维A酸相关孤儿受体、白细胞介素17表达
目的：探讨Th17/白细胞介素（IL）17轴在小鼠念珠菌性阴道炎发病中作用。方法120只雌性BALB/c小鼠随机分为雌激素感染组（Ei）、雌激素非感染组（En）、对照感染组（Ci）和对照非感染组（Cn）。Ei、En组在阴道接种前3 d于后腿皮下注射雌二醇0.05 mg，而Ci、Cn组皮下注射灭菌大豆油0.1 ml，以后隔日注射1次直至实验结束；Ei、Ci组在接种日在阴道内接种白念珠菌悬液10μl（5×104个孢子），而En、Cn组阴道内注入10μl无菌磷酸盐缓冲液。接种后3、7、14 d，每组于各时间点分别随机取10只小鼠处死，完整切取阴道组织作液氮冷冻或石蜡包埋，实时荧光定量PCR （qRT?PCR）、Western印迹和免疫荧光染色分别检测阴道组织中维A酸相关孤儿受体（ROR）γt、RORα、IL?17 mRNA、蛋白表达及免疫荧光强度。结果激光共聚焦显微镜显示，En、Cn组中RORγt、RORα和IL?17主要表达于阴道固有膜及血管中炎症细胞，Ci组中主要表达于黏膜上皮及其表面附着的菌丝、固有膜及血管中炎症细胞，Ei组中则广泛分布于黏膜上皮、固有膜及血管中炎症细胞、阴道腔和黏膜上皮中内吞菌丝。qRT?PCR和免疫荧光检查显示，En、Ci和Ei组中RORγt、RORα、IL?17 mRNA表达及其免疫荧光强度在相同时间点均显著高于Cn组（均P<0.05），且Ei组显著高于En、Ci组（P<0.05）；除Cn组外，其余各组中RORγt、RORα、IL?17 mRNA表达及其免疫荧光强度均随时间延长有增加的趋势，其中RORγt、RORαmRNA和免疫荧光强度及IL?17 mRNA一般在14 d时高，而IL?17免疫荧光强度在7 d时高（P<0.05）。Western印迹显示，Ci、Ei组中RORγt和IL?17蛋白表达在相同时间点均明显高于Cn、En组（RORγt：F组别=45.685，P<0.001；IL?17：F组别=29.655，P<0.01），其中Ei组表达水平高（P<0.05），而Cn、En组表达差异无统计学意义（P>0.05）；Ci、Ei组中二者表达均在感染后7 d明显上调，14 d无显著增加（RORγt：F时间=13.137，P<0.001；IL?17：F时间=11.182， P<0.001）。结论阴道念珠菌感染可上调RORγt、RORα、IL?17表达，提示Th17/IL?17轴可能参与BALB/c小鼠念珠菌性阴道炎发生。
