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尿紧张素Ⅱ诱导人皮肤成纤维细胞增殖和α平滑肌肌动蛋白表达的机制研究
目的 探讨尿紧张素Ⅱ(U Ⅱ)对体外培养人正常皮肤成纤维细胞(NF)增殖和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的生物学功能影响及调控机制.方法 原代培养NF,采用反转录PCR和Western印迹法分别检测U Ⅱ及其受体mRNA和蛋白表达水平.采用CCK8法观察不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L)U Ⅱ作用0、6、12、24、48 h对NF增殖的影响,筛选出UⅡ佳作用浓度为10-8 mol/L,刺激时间为24 h.将NF分为5组:对照组(不含UⅡ)、U Ⅱ组、U Ⅱ+尼卡地平(钙通道阻断剂,10-5 mol/L)组、U Ⅱ+PD98059[丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)抑制剂,105mol/L]组和U Ⅱ+环孢素[钙蛋白激酶(CaM PK)阻断剂,10-5 mol/L]组,UⅡ浓度均为10-8 mol/L,刺激NF24h后,采用CCK8法检测各组NF的增殖活性,以实时定量荧光PCR和Western印迹法分别检测各组α-SMAmRNA与蛋白的相对表达水平.结果 NF表达U Ⅱ受体,不表达U Ⅱ.对照组、UⅡ组、UⅡ+尼卡地平组、U Ⅱ+ PD98059组和U Ⅱ+环孢素组NF细胞增殖活性(A450值)分别为1.036±0.046、1.405±0.158、1.121±0.109、1.192±0.089和1.141±0.056,组间差异有统计学意义(F=9.587,P＜ 0.01),U Ⅱ组高于对照组、U Ⅱ+尼卡地平组、U Ⅱ+ PD98059组、U Ⅱ+环孢素组(q值分别为8.263、6.355、4.774、5.912,均P＜0.05).5组间NF细胞α-SMA mRNA与蛋白的相对表达量差异亦均有统计学意义(F值分别为6.351、7.045,均P＜0.01),且U Ⅱ组α-SMA mRNA及蛋白表达量均高于另4组(均P＜0.05).结论 U Ⅱ可能通过钙通道、MAPK和CaM PK通路诱导NF增殖和α-SMA的表达.
