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甘氨脱氧胆酸诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡中对P53表达的影响
目的 探讨甘氨脱氧胆酸(GDCA)在诱导SMMC-7721细胞凋亡中对P53表达的影响.方法 用膜联蛋白V(annexinV)检测细胞凋亡,RT-PCR分析p53 Mrna变化,免疫组化技术分析P53蛋白表达.结果 GDCA可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,具有明显的时间和剂量依赖.200 μmol/L GDCA处理组在48 h和72 h的细胞凋亡率分别为(7.67±2.35)%、(12.93±1.48)%;400 μmol/L GDCA处理组则分别为(13.14±2.56)%、(14.22±2.11)%.GDCA可明显提高p53 Mrna水平,且较强地抑制突变的P53蛋白的表达.结论 GDCA具有诱导SMMC-7721细胞凋亡作用.
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甘氨脱氧胆酸对人肝癌细胞增殖抑制与诱导凋亡的实验研究
目的 探讨甘氨脱氧胆酸(GDCA)对人肝癌细胞SMMC7721增殖的影响以及细胞凋亡作用.方法 采用96孔细胞培养板体外培养人肝癌细胞株SMMC7721,在24、48、96 h后加入GDCA,并进行四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验,计算肝癌细胞的生长抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的影响.结果 GDCA对肝癌细胞SMMC7721有增殖抑制作用,GDCA作用细胞72 h后,200、400、800 μmo/L GDCA抑制率分别为18.18%、29.94%和88.54%;细胞周期分析显示,G1期细胞比例与对照组相比明显升高,GDCA200、400μmol/L处理组P＜0.05,S期有不同程度的下降,GDCA400 μmol/L处理组P＜0.01.Annexin V-FITC检测结果显示GDCA 200、400 μmol/L处理组48和72 h后细胞凋亡比例比对照组明显增加,差异具有统计学意义.结论 GDCA对人肝癌细胞有增殖抑制作用,并能诱导SMMC7721细胞凋亡.
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甘氨脱氧胆酸盐诱导HL-7702凋亡及细胞内Ca2+浓度变化
目的 观察甘氨脱氧胆酸盐(GCDC)对体外培养的人正常肝细胞株HL-7702的凋亡诱导作用及在凋亡过程中细胞内Ca2+浓度的变化,探讨GCDC致肝细胞损伤的机制.方法 以GCDC为处理因素,体外培养HL-7702细胞,普通光学显微镜观察细胞形态变化,AnnexinⅤ-EGFP/PI双染色法检测细胞凋亡率,荧光染料Fluo-3/AM负载技术检测细胞内Ca2+浓度的变化.结果 GCDC作用于HL-7702细胞后,细胞形态呈现凋亡特征,细胞的凋亡率、细胞内Ca2+浓度与GCDC呈剂量及时间依赖性.结论 GCDC能诱导体外培养的HL-7702细胞凋亡,细胞内Ca2+浓度的变化是诱导细胞凋亡的机制之一.
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甘氨脱氧胆酸诱导大鼠肝细胞凋亡
目的：探讨甘氨脱氧胆酸（Glycodeoxycholate，GDC）与大鼠肝细胞凋亡的关系。 方法：以GDC为处理因素，体外培养大鼠原代肝细胞，分别用光镜、电镜、TUNEL原位杂交，流式细胞术和DNA电泳技术观察和分析GDC诱导大鼠肝细胞凋亡的作用。 结果：大鼠肝细胞在加入终浓度为100μmol/L的GDC培养2h后，光镜、电镜、TUNEL原位杂交，可见凋亡细胞。终浓度为50、100、150μmol/L培养2h，及终浓度为100μmol/L GDC分别培养2、4、6、8h，DNA电泳均可见典型Ladder图谱。 结论：GDC浓度为50，100，150μmol/L能诱导大鼠肝细胞凋亡。
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甘氨脱氧胆酸激活大鼠肝细胞磷脂酶A2和对血清磷脂酶蛋白及mRNA水平的表达
实验证实甘氨脱氧胆酸（glycodeox-ycholic acid，GDC）≥250μmol/L可导致大鼠肝细胞坏死，细胞膜流动性降低[1]。磷脂酶A2（phospholipase A2，PLA2）过量释放和/或激活在多系统器官衰竭的发展中起着关键作用。用GDC处理原代培养大鼠肝细胞，以探讨GDC对sPLA2酶活性的激活，酶蛋白和基因表达的影响。
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甘氨脱氧胆酸对肝细胞谷胱甘肽过氧化物酶的影响
目的：观察甘氨脱氧胆酸(GDCA)对肝细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－PX)的影响，探讨GDCA对肝细胞过氧化脂质作用的机理。方法：体外培养肝细胞，以GDCA为处理因素，测定肝细胞GSH－PX谷胱甘肽过氧化物酶活力。结果：GDCA终浓度分别为50、100、150、200、250μmol／L，培养3小时，GSH－PX活力分别为（±SD，n＝4）：22.00±（t＝0.245），20.17±0.59（t＝4.47），17.5±0.86（t＝8.475），14.60±0.58（t＝16.73），12.52±0.95（t＝16.83）。GDCA终浓度150μmol／L，分别1、2、3、4小时，GSH－PX活力分别为（±SD，n＝4）：22.40±0.65（t＝0.945），20.30±0.47（t＝3.359），17.58±1.15（t＝6.722），14.40±0.86（t＝12.33）。结论：GDCA能使GSH－PX活力下降，并对浓度和培养时间有依赖性。
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肝硬化患者血小板钙离子浓度变化及机制研究
目的探讨肝硬化患者血小板[Ca2+]i和甘氨脱氧胆酸(GDCA)对血小板[Ca2+]i的影响.方法荧光分光光度法测定肝硬化患者血小板[Ca2+]i,以Fura2/Am负载血小板,用甘氨脱氧胆酸作为处理因素,观察加入甘氨脱氧胆酸前后及不同浓度,不同时间,血小板[Ca2+]i的变化.结果①肝硬化患者血小板[Ca2+]i明显高于对照组(P＜0.01),上消化道出血组明显高于无出血组(P＜0.01).②静息状态血小板[Ca2+]i为58.74±5.45(n＝3),在血小板处于无Ca2+情况下,加入GDCA终浓度为100μmol/L时,随时间的延长血小板[Ca2+]i显著增加;GDCA终浓度分为0、50、100、150、200μmol/L时血小板[Ca2+]i随浓度增加而显著增加.血小板在有Ca2+环境下(Ca2+终浓度为1.3mmol/L),加入GDCA后,血小板[Ca2+]i随作用时间和GDCA浓度的增加而显著增加.结论肝硬化患者血小板[Ca2+]i显著增加.GDCA能诱导血小板外Ca2+内流和内贮Ca2+释放,并与GDCA浓度和作用时间有关.肝硬化患者血小板[Ca2+]i可能与胆汁淤积所致胆汁酸增加有关.
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甘氨脱氧胆酸对肝细胞钙激活性钾通道的影响
目的观察甘氨脱氧胆酸(GDC)对大鼠肝细胞钙激活性钾通道(KCa)开放概率的影响.方法体外培养大鼠肝细胞,以GDC为处理因素,应用膜片钳技术通过贴附式和内面向外式膜片测定大鼠KCa开放概率.结果①细胞贴附式膜片下,浴液中Ca2+浓度10-7mol/L,GDC终浓度为50,100,250μmol/L时,概率由0.038±0.09分别增加到0.620±0.338,0.591±0.163,0.895±0.176(n=4,P均＜0.01).浴液中不加GDC,改变Ca2+浓度(10-7、10-6、10-5mol/L),KCa的开放概率并不发生明显改变,而在此液中加入GDC(终浓度100μmol/L),KCa开放概率由0.042±0.015增加到0.385±0.330和0.551±0.163(n=4,P均＜0.05).浴液中不含Ca2+,并加入EGTA,GDC浓度为50,100,250μmol/L,KCa开放概率显著增加(n=4,P均＜0.05),但比浴液中有Ca2+时增加程度小.②内面向外式膜片下,浴液中无Ca2+,加入GDC(10,50,100,250μmol/L),KCa开放概率无明显改变(n=2,P＞0.05).结论①GDC对KCa有明显的激活作用,并有浓度依赖性.②GDC既有引起胞外Ca2+内流,也能诱导内贮Ca2+的释放.③GDC对KCa的激活是通过Ca2+实现的.
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甘氨胆酸中有关物质检查方法的研究
目的:建立HPLC-ELSD法测定甘氨胆酸的有关物质.方法:采用Gemini C18色谱柱(4.6 mm× 150 mm,5.μm),以乙腈-0.1％甲酸(48∶52)为流动相,流速0.5 mL·min-1,ELSD检测,漂移管温度95℃,气体流速2.5 L·min-1,Gain为8.结果:在选定的条件下,甘氨胆酸与其中的5个杂质胆酸、甘氨胆酸乙酯、甘氨脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸乙酯、胆酸乙酯分离良好,它们的检测限相当的杂质浓度分别为0.008％、0.016％、0.016％、0.016％、0.022％、0.016％;5个杂质的平均回收率分别为100.5％ 、98.1％、105.7％、100.7％、101.4％;且上述6个物质浓度在3.75 ～31.25 μg·mL-1范围内峰面积的对数与浓度的对数呈良好线性关系.结论:经方法学验证,本法简便、专属、准确,可用于甘氨胆酸中有关物质的检查.
