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重组人白介素-3文献资料
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原核表达重组人白介素-3及其对脐带血造血干细胞体外增殖的影响
目的 研究原核表达重组人白介素-3(rhIL-3)及其对脐带血造血干细胞体外增殖的影响.方法 构建pET-43.1-rhIL-3表达载体,克隆至BL21菌株,并进行中试发酵生产,所得包涵体经透析复性后,采用阳离子交换柱纯化,纯化产物送N-端测序.Ficoll密度梯度离心结合免疫磁珠法富集人脐带血中CD34+细胞,以不同浓度rhIL-3及干细胞因子(SCF)、Fms样酪氨酸激酶受体-3配体(FL)和促血小板生成素(TPO)因子组合培养1周,测定细胞总数,计算CD34+细胞增殖倍数.结果 在SCF和FL存在下,rhIL-3可明显促进造血干祖细胞增殖,但较无rhIL-3时CD34+细胞占细胞总数的比例有所下降.与SCF、FL共同作用时的佳浓度在15ng/mL左右,与SCF、FL、TPO共同作用时的佳浓度在50ng/mL左右.结论 高效表达及纯化的rhIL-3与SCF、FL和TPO细胞因子组合对脐带血造血干细胞具有良好的增殖作用.
