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雷公藤单体T10对Aβ1-42所致PC12细胞凋亡的抑制作用
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是发病率高的中枢神经系统退变性疾病.目前AD的病因不清,亦无有效的防治手段,其重要的原因是尚无适宜的AD模型.因此,本实验首先建立了PC12细胞系β淀粉样蛋白(p-amyloid,Aβ)细胞损伤模型,在此基础上,探讨了中药免疫抑制剂雷公藤单体T10对细胞的保护作用及其机制.首先用不同浓度的Aβ(5×10、5×10-3、5×10-2、5×10、5、50 μmol/L)与PC12细胞共孵育48 h,用MTT法检测细胞存活率.选取Aβ致使细胞存活率降低的浓度(0.5、5、50 μmol/L)与PC12细胞共孵育48 h,通过流式细胞仪检测凋亡细胞百分比.用1×10-11mol/L的T10预孵育PC12细胞48 h后,加入50μmol/L Ap共孵育48 h,亦用流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度变化.结果显示,Aβ的浓度存50μmol/L时可使细胞存活率降低至55.1%,凋亡细胞比例显著增加,而1×10-11mol/L的T10可明显降低50 μmol/L Aβ诱导的PC12细胞死亡.50 μmol/L Aβ可促进PC12细胞胞外钙离子内流,1×10-11mol/L的T10对Ap诱导的胞外钙离子内流有抑制作用.这些观察结果表明T10对Ap导致的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制Aβ诱导的胞内钙离子浓度升高和细胞凋亡有关.
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雷公藤单体T10对过氧化氢所致PC12细胞损伤的保护作用及其机制的研究
目的 以过氧化氢(H2O2)为工具药,建立阿尔茨海默病(AD)的氧化应激模型.观察雷公藤内酯醇(T10)的保护作用并初步探讨其作用机制.方法 用不同浓度(25、50、100、200μmol/L)的H2O2处理PC12细胞24 h,100μmol/L H2O2处理PC12细胞不同时间(6、12、24及48 h),建立细胞损伤模型.用1、10、30 nmol/L T10预孵育PC12细胞12 h后加入100μmol/L H2O2共同作用24 h以探讨T10的保护作用.MTT法检测细胞存活率,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,并采用荧光素酶报告基因方法检测转录因子NF-κB转录活性以探讨T10作用机制. 结果 随着H2O2浓度增加或作用时间延长,PC12细胞MTT值逐渐降低,而LDH释放量逐渐增加.100μmol/L H2O2处理细胞24h,MTT值明显下降,LDH释放量增加.而1、10、30 nmol/L的T10预孵育12 h可明显减轻PC12细胞的损伤,提高MTT值并降低LDH释放量.100μmol/L H2O2作用4 h可明显增加PC12细胞NF-κB的转录活性,而1、10、30 nmol/L的T10预处理12 h可显著拮抗NF-κB转录活性的升高.结论 T10可以有效的拮抗H2O2对PC12细胞的氧化损伤,作用机制可能与其降低转录因子NF-κB的转录活性有关.
