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Vcp mRNA在胃癌中表达的研究
目的:研究Vcp mRNA表达与胃癌及淋巴结转移的关系,寻找术前预测淋巴结转移危险度及预后的标志基因.方法:采用RT-PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳EB染色法,检测42例胃原发癌、正常黏膜、淋巴结转移癌中Vcp mRNA的表达.结果:Vcp mRNA在上述组织细胞中均有表达,胃原发癌和淋巴结转移癌明显高于正常黏膜(P<0.01),且胃原发癌Vcp mRNA表达与转移淋巴结数量具有相关性.结论:胃原发癌Vcp mRNA过度表达的患者淋巴结转移范围及程度相对较重,癌细胞侵袭力较强,宜行扩大根治术;术前RT-PCR检测胃原发癌Vcp mRNA表达有助于确定治疗方案及判断预后.
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miR-129-5p靶向调控VCP抑制骨肉瘤细胞体外迁徙侵袭
目的 探讨miR-129-5p是否靶向调控VCP基因抑制骨肉瘤细胞迁徙侵袭.方法 构建miR-129-5p过表达及低表达的慢病毒载体,转染骨肉瘤细胞U2-OS;采用实时荧光定量PCR检测上调及下调miR-129-5p的U2-OS细胞中miR-129-5p的表达量;采用RT-PCR和Western blot技术检测VCP mRNA和蛋白表达;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁徙、侵袭情况.结果 实时荧光定量PCR结果显示U2-OS细胞中miR-129-5p表达被明显上调或下调;RT-PCR和Western blot检测结果显示:miR-129-5p上调U2-OS细胞组中VCP mRNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照细胞组(阴性慢病毒转染);miR-129-5p下调U2-OS细胞组中VCP mRNA和蛋白表达水平显著高于阴性对照细胞组;miR-129-5p上调U2-OS细胞迁徙和侵袭力显著低于阴性对照细胞,miR-129-5p下调的U2-OS细胞迁徙和侵袭力显著高于阴性对照细胞.结论 miR-129-5p靶向调控VCP的表达而抑制骨肉瘤细胞迁徙和侵袭能力.
关键词： 骨肉瘤 迁移 侵袭 miR-129-5p Vcp -
miRNA沉默VCP对骨肉瘤细胞U2-OS增殖和迁移的影响
目的 探讨沉默VCP基因对人骨肉瘤细胞系增殖、迁移的影响.方法 构建靶向VCP 基因的重组质粒载体(X135-1-2、X135-2-1、X135-3-1)和阴性对照载体(Negative),测序鉴定;X135-1-2、X135-2-1、X135-3-1分别转染人骨肉瘤细胞系U2-OS(阳性干扰组:X135-1-2组、X135-2-1组、X135-3-1组),Negative质粒转染为阴性对照组,未转染细胞为空白对照组.RT-PCR检测VCP mRNA的表达水平,Western blot测定VCP的蛋白表达水平,MTT检测细胞的增殖情况,Transwell migration实验检测细胞迁移力.结果 转染后48 h,与空白对照组和阴性对照组比较,X135-1-2、X135-2-1和X135-3-1组VCP mRNA和蛋白的表达均明显降低,尤以X135-3-1组更为显著[VCP mRNA和蛋白表达抑制效率分别为(81.4±3.0)%和(83.3±6.0)%];各阳性干扰组细胞的增殖能力均被明显抑制,以X135-3-1组更为显著(P<0.05);各阳性干扰组细胞的迁移能力明显下降,以X135-3-1组更为显著(P<0.05).结论 沉默VCP能有效抑制人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞的增殖和迁移,VCP可能是骨肉瘤治疗的分子靶点.
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一氧化氮在TRAIL诱导凋亡中对p53和VCP蛋白表达的影响
目的 研究NO在TRAIL诱导凋亡过程中对p53和VCP蛋白表达的影响.方法 利用Western blot蛋白印迹法检测各蛋白表达水平;用MTT方法检测细胞凋亡和caspase-3激酶激活状态.结果 内源性NO表达产生的一氧化氮可提高TRAIL诱导的细胞凋亡率,同时增加caspase-3激酶激活活性.内源性NO对p53蛋白表达水平无影响,但是对VCP蛋白表达的上调有一定促进作用.结论 内源性NO对管家基因p53蛋白无明显影响,但对与内质网压力相关的VCP蛋白有调节作用.
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VCP截段基因酵母双杂交猎物质粒的构建及可行性检验
扩增VCP(799-1560)、VCP(1447-2406)、VCP(1 -891)基因,并将扩增片段导入猎物载体 pMyr中构建酵母双杂交猎物载体 pMyr-VCP (799-1560)、pMyr-VCP(1447-2406)和pMyr-VCP(1-891),用重组质粒转化感受态酵母菌 cdc25H,检验其表达产物在酵母细胞中有无毒性及自激活作用. 经序列分析,该试验成功构建了VCP截段基因酵母双杂交猎物载体,且该猎物质粒的表达产物对酵母菌cdc25 H无毒性和无自激活作作用.
