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下调hnRNP A2/B1基因表达对骨肉瘤MG-63细胞生长的影响及其机制
目的:通过下调核内不均一核糖核蛋白A2/B1 (heterogeneous-nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)的表达,探讨该基因对骨肉瘤MG-63细胞体内外生长的作用及其分子机制.方法:将细胞分为空白对照组(未转染)、阴性对照组(转染阴性对照质粒)和hnRNP A2/B1下调组(转染shRNA-hnRNP A2/B1干扰质粒).质粒转染骨肉瘤MG-63细胞后,观察绿色荧光蛋白的表达,以鉴定转染效果.采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测3组细胞中hnRNP A2/B1、磷酸化的AktThr308(phosphorylated AktThr308,p-AktThr308)、p-AktSer473及Akt下游分子p21、p27、cleaved caspase-3和Bcl-2的表达变化;MTT法和FCM法分别检测各组细胞的增殖活力、周期分布和早期凋亡率.将阴性对照组和hnRNP A2/B1下调组细胞分别接种入同一裸鼠的对称部位皮下组织,观察移植瘤生长情况,并采用免疫组织化学法检测各组移植瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki-67的表达.结果:阴性对照组和hnRNP A2/B1下调组细胞中均有绿色荧光蛋白表达,说明质粒转染成功.与空白对照组和阴性对照组相比,hnRNP A2/B1下调组中hnRNP A2/B1、p-AktThr308、p-AktSer473和Bcl-2表达水平显著降低(P值均＜ 0.05),且p21、p27和cleaved caspase-3表达水平明显升高(P值均＜ 0.05);hnRNP A2/B1下调组细胞活力明显降低(P＜0.05),细胞周期阻滞于G1期(P＜0.01),S期细胞比例降低(P＜0.01),同时细胞的早期凋亡率升高(P＜0.001).动物体内研究证实,hnRNP A2/B1下调组裸鼠移植瘤体积明显小于阴性对照组(P＜0.05),并且hnRNP A2/B1下调组移植瘤组织中PCNA和Ki-67的表达水平明显降低(P值均＜0.05).结论:下调hnRNP A2/B1基因表达能够抑制骨肉瘤细胞的生长,其机制可能涉及Akt信号通路的调控.
关键词： 骨肉瘤 核内不均一核糖核蛋白A-B组 细胞增殖 细胞凋亡 异种移植模型抗肿瘤试验
