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BMP9通过BMPs/SMAD信号通路抑制肺腺癌A549细胞的增殖
目的:探讨骨形态发生蛋白9 (bone morphogenetic protein 9,BMP9)是否可以通过BMPs/SMAD信号通路抑制人肺腺癌细胞A549的增殖.方法:采用慢病毒感染的方式将外源性BMP9转入人肺腺癌A549细胞中,并应用半定量RT-PCR及蛋白质印迹法检测病毒感染后A549细胞中BMP9表达的改变.采用MTT法和FCM法检测BMP9过表达对A549细胞增殖和周期的影响.蛋白质印迹法检测BMPs/SMAD信号通路中总SMAD1/5/8和磷酸化SMAD1/5/8蛋白表达水平的改变.半定量RT-PCR及蛋白质印迹法检测BMP9过表达对分化抑制因子3(inhibitor of differentiation 3,ID3)mRNA和蛋白表达的影响.将构建有BMP9的慢病毒和构建有SMAD4-shRNA的慢病毒共感染A549细胞,以阻断BMPs/SMAD通路的激活,采用蛋白质印迹法检测磷酸化SMAD1/5/8和ID3表达的改变.结果:与空白对照组和阴性对照组相比,感染BMP9慢病毒后A549细胞中BMP9 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P值均＜0.05).MTT法和FCM法检测结果显示,病毒感染3d后,BMP9过表达组吸光度(D)值均较空白对照组的和阴性对照组明显降低(P值均＜0.05);细胞周期阻滞在G2/M期,G2/M期细胞所占的比例均较空白对照组和阴性对照组明显提高(P值均＜ 0.05).蛋白质印迹法检测结果提示,BMP9过表达可使磷酸化SMAD1/5/8和ID3蛋白的表达水平明显上调,激活BMPs/SMAD通路.当干扰BMPs/SMAD信号通路关键分子SMAD4的表达后,可抑制BMP9激活的BMPs/SMAD通路,下调磷酸化SMAD1/5/8和ID3蛋白的表达水平(P值均＜0.05).结论:BMP9可通过激活BMPs/SMAD信号通路,上调ID3的表达来抑制A549细胞的增殖.
关键词： 癌 非小细胞肺 骨形态发生蛋白质类 分化抑制蛋白质类 BMPs/SMAD信号通路
