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脑死亡者供肝切取方法与临床肝移植疗效的关系(Pittsburgh经验)
目的:介绍美国匹兹堡大学移植研究所在脑死亡者肝脏的方法及影响供肝质量的因素.方法:回顾性分析32例同种异体肝脏获取的手术方法,同时观察原位肝移植后的临床结果. 结果:男∶女=23∶9,平均年龄为38.2岁±12.7岁.脑死亡原因:创伤21 例(65.63%),脑血管意外9例(28.13%).14例(43.75%)有肝动脉解剖异常,其中仅右 肝动脉变异者7例(21.88%),仅左肝动脉变异者5例(15.63%),左、右肝动脉均变异的2 例(6.25%); 8例(57.14%)变异的肝动脉须在移植前加以重建.在评价移植肝早期功能 时,供肝功能良好者27例(84.38%),差者3例(9.38%),2例(6.25%)供肝无功能.术后 近期死亡者一例,余31例手术后均恢复良好,其中日后作再移植者4例.结论:在获取供肝过程中,充分注意肝素化、原位灌注加局部降温,以及标准化手术操作是保 证供肝质量的要素;供体手术中应注意有无肝动脉解剖异常,并避免损伤;供体年龄、供体 在ICU逗留时间、不正常的供肝形态及围手术期/或术后发生如动脉血栓形成等情况都会明显影响移植肝脏的早期功能.
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低温保存人肝细胞Na+/H+交换与细胞内钙和细胞活力的关系
我们通过阻滞Na+/H+交换,观察低温保存肝细胞Na+/H+通道的特点及其对细胞内Ca2+和细胞存活率的影响,现将结果报道如下。 一、材料和方法 1. 试剂:Ⅱ型胶原酶,透明质酸酶,DNA酶Ⅰ,阿米洛利(A)购于Sigma公司,离解酶Ⅱ型购自Boehringer公司。 2. 肝细胞分离及保存:按照Seglen［1］的方法并做改进。肝脏获取后,以1 000 ml含乙二醇四乙酸(EGTA)0.5 mmol/L的Hanks液以每支管20 ml/min的速度灌注。然后改以500 ml含Ca2+、Mg2+,15 mmol/L的4-2-羟乙基-1-哌嗪乙磺酸(HEPES),0.5 mmol/L的Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶的Hanks液循环灌注至肝脏彻底消化,小心取出肝细胞放入含体积分数为10%小牛血清,0.01%DNA酶I,0.01%Ⅱ型离解酶及0.08 mmol/L的Mg2+的1640培养基中混均,过滤。然后4℃,50 g离心5 min,以含钙的Hanks液漂洗至少3次。取细胞悬液台盼蓝染色判断细胞存活率。离心后肝细胞悬液均匀悬于高Na+保存液(高Na+保存液配方为：NaCl 137 mmol/L；KCl5.40 mmol/L；KH2PO40.44 mmol/L；NaH2PO41.34 mmol/L；MgSO40.83 mmol/L；CaCl21.67 mmol/L；葡萄糖10 mmol/L；半乳糖5 mmol/L；NaHCO3 10 mmol/L；HEPES 20 mmol/L；青霉素0.1 g/L；丙酮酸盐5 mmol/L)中低温保存。实验组加1 mmol/L的阿米洛利。分别于0、15、30 min、1、2、6、12 h取肝细胞行细胞内Na+、Ca2+及细胞存活率的检查。
