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RH株弓形虫速殖子体外入侵大鼠肠上皮细胞与增殖的动态观察
目的 动态观察弓形虫RH株速殖子(简称速殖子)体外入侵大鼠肠上皮细胞(IEC-6细胞)及其增殖过程. 方法 取24孔培养板,设实验组及对照组各3孔,每孔放置经预处理的盖玻片.将常规传代堵养的IEC-6细胞接种于各培养孔,于37℃5%CO2培养箱培养24h,吸弃培养液,实验组每孔加入1 ml速殖子悬液(含1×106个速殖子),对照组每孔加入1 ml无抗生素培养液,共培养.用倒置显微镜连续观察速殖子粘附、入侵IEC-6细胞及其增殖过程,并分别于共培养5～30min、1～48 h后取出盖玻片,经吉氏-瑞氏染色后光镜观察其入侵和增殖情况,计算入侵率.结果 共培养5 min,速殖子即可入侵IEC-6细胞,随着共培养时间的延长入侵的速殖子逐渐增多,1 h为1～5个,入侵率为(55.0±6.6)%.2 h入侵率高达(81.8±10.2)%,有假包囊形成,速殖子可入侵细胞核并在核内增殖.4 h入侵率降为(80.8±9.2)%,假包囊破裂释出成簇排列的速殖子.6h入侵率为(75.1±8.2)%,成簇排列的速殖子显著增多.12 h成簇排列的速殖子减少,多数速殖子游离细胞外,完整的IEC-6细胞明显减少.24 h只见部分IEC-6细胞和假包囊存在,有大量游离的速殖子.48 h见大量游离速殖子,未见贴壁细胞.结论 体外培养的弓形虫速殖子可迅速入侵IEC-6细胞,并可在细胞质及细胞核内增殖.增殖周期为6～12 h.
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外源性花生四烯酸在弓形虫入侵巨噬细胞中的信号作用
目的探讨花生四烯酸在弓形虫侵染巨噬细胞中的信号作用.方法采用普通光镜、流式细胞仪检测巨噬细胞的感染率;Fura-2/AM染色,荧光分光光度法测定游离钙离子浓度.结果宿主细胞内钙离子浓度及巨噬细胞感染率随着外源性花生四烯酸浓度的增加而升高,并呈剂量依赖性关系.细胞外的钙离子内流,细胞内储存的钙离子释放,包括胞膜钙离子通道均在花生四烯酸的作用下,参与了胞内钙离子的升高.钙离子通道阻断剂对花生四烯酸作用前后的感染率的影响不明显.结论花生四烯酸可能通过钙离子作用于宿主细胞,增高其感染率.
