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制备型电泳文献资料
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组织蛋白酶B酶联免疫吸附测定方法的建立
背景:组织蛋白酶B(CB)与恶性肿瘤的分期、转移和预后关系密切.目的:建立CB酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,以便评价肿瘤患者血清CB含量与预后的关系.方法:将含有CB cDNA的重组痘苗病毒转染Hela细胞,表达目的蛋白重组CB;经Western blot分析和制备型电泳纯化后,免疫新西兰大白兔,获得CB多克隆抗体.纯化后的抗体一部分作为固化抗体,另一部分用辣根过氧化物酶标记;棋盘滴定法确定工作浓度.结果:痘苗病毒真核表达系统可以高效表达目的蛋白.制备型电泳能简单、有效地纯化蛋白.重组CB免疫动物后,可获得高效价的CB多克隆抗体,用以制备相应的固化抗体和酶标抗体检测CB.结论:用重组CB免疫动物后可获得相应抗体,以建立CB检测的ELISA方法.
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重组组织蛋白酶B的表达和纯化
背景:研究表明组织蛋白酶B(CB)与肿瘤转移相关.目的:用基因工程技术生产大量重组CB,为研究CB的生物学特性和制备CB抗体供临床检测作准备.方法:用重组痘苗病毒转染真核细胞,采用真核表达目的蛋白CB,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法鉴定目的蛋白.根据CB的分子量和等电点,用制备型电泳纯化蛋白.结果:痘苗病毒真核表达系统可以高效表达目的蛋白,产量为0.12 mg/108细胞.重组CB的分子量(31 kDa和25 kDa)、等电点(4.552～5.588)和免疫原性与天然CB一致.制备型电泳能简单、有效地纯化蛋白.结论:运用痘苗病毒真核表达系统可以高效表达CB.
