首页 > 文献资料
-
多顺反子腺病毒表达载体PCA13/FasL-IRES-iNOS的构建和鉴定
背景:腺病毒具有免疫原性,可被机体快速免疫清除,导致目的基因失去表达,这是其作为基因治疗载体的主要缺陷.一些特定的细胞,如角膜上皮细胞和睾丸Sertoli细胞能表达和分泌Fas配体(FasL),诱导带有Fas分子的免疫细胞发生凋亡.目的:构建FasL和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)共表达PCA13质粒用于腺病毒的包装,以进一步观察FagL对腺病毒载体的免疫保护作用.方法:利用内源性核糖体进驻位点(IRES),通过感受态细胞的制备和转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳以及限制性内切酶等多种基因工程技术,经多步亚克隆后完成能同时表达FasL和iNOS基因的多顺反子腺病毒表达载体PCA13/FasL-IRES-iNOS的构建.结果:新质粒PCA13/FasL-IRES-iNOS经限制性内切酶酶切后得到1 600 bp(600 bp FasL,1 000 bp IRES)和4 000 bp(iNOS)的相应基因片断,基因序列经测定与基因文库报道相符.结论:成功构建了多顺反子腺病毒表达载体PCA13/FasL-IRES-iNOS,为门脉高压症的基因治疗打下了基础.
-
重组多顺反子逆转录病毒介导的人载脂蛋白AI与卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶在肌源性细胞的表达
目的:载脂蛋白AI(apolipoprotein, apoAI)与卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶(lecithin:cholesterol acyltransferase, LCAT)作为高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)的主要组分,在胆固醇由周围组织向肝脏的运输、排泄过程即胆固醇逆转运(reverse cholesterol transport, RCT)过程中起关键作用.近年研究进一步证实,ApoAI与LCAT的转基因动物能纠正由于遗传缺陷所致的低HDL血症并有效抵抗高脂食物引起的致动脉粥硬化(atherosclerosis, As)作用.