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甘氨鹅去氧胆酸对大鼠肝窦内皮细胞凋亡的影响
背景:肝窦内皮细胞(SEC)凋亡是肝脏疾病发生、发展的重要因素之一.在胆汁淤积症中,疏水性胆汁酸甘氨鹅去氧胆酸(GCDC)直接诱发肝细胞凋亡,而亲水性胆汁酸熊去氧胆酸(UDCA)能防止诱发肝细胞凋亡.目的:研究GCDC引起原代培养大鼠SEC损害和凋亡、UDCA对GCDC诱导凋亡的抑制作用以及涉及caspase-8的作用机制.方法:采用胶原酶A原位灌注和Percoll分离液(25%和50%)梯度离心法分离Wistar大鼠SEC,SEC于添加了EGM-2因子的EBM-2培养基中培养(5%CO2,37℃)3 d,然后在含有GCDC和(或)UDCA的新鲜培养液中继续培养4 h.以原位末端标记(TUNEL)技术检测SEC凋亡情况.以FLICE/caspase-8比色蛋白酶检测试剂盒测定caspase-8的表达情况.结果:相差显微镜下,培养3 d时的SEC呈纺锤状并基本融合.而在与GCDC孵育的过程中SEC趋于皱缩,孵育4 h时终从培养皿脱落.SEC与不同浓度的GCDC(50～250μmol/L)孵育1 h后,TUNEL染色阳性的细胞数量开始增加,4 h后几乎所有细胞呈TUNEL染色阳性(P＜0.05);对照组SEC仅少数呈TUNEL染色阳性.在原代培养SEC与终浓度100μmol/L GCDC培养液中加入UDCA(50～200 μmol/L)可明显减少TUNEL染色阳性的SEC,且抑制作用呈剂量依赖性(P＜0.05);200μmol/L UDCA存在时,GCDC引起SEC凋亡的水平是GCDC单独孵育4 h时的20%.SEC与250 μmol/LGCDC孵育2 h,SEC中caspase-8表达明显增加,而加入200μmol/L UDCA则几乎可完全阻止caspase-8表达增加.结论:UDCA能阻止GCDC诱发的原代培养SEC凋亡,此作用至少部分是通过抑制GCDC上调SEC中caspase-8的表达而实现的.
