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FLO8基因文献资料
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白念珠菌FLO8基因高表达菌株构建及鉴定
目的:构建白念珠菌FLO8基因高表达菌株.方法:将白念珠菌FLO8基因插入pCP20质粒载体ADH1启动子后,通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)将ADH1-FLO8-LoxP-ARG4-LoxP-ADE2片段扩增,并通过同源重组技术将该片段整合至SN152的ADE2位点.结果:通过测序鉴定FLO8基因高表达质粒载体构建成功;通过同源重组及实时反转录PCR验证表明FLO8基因整合到SN152菌株的ADE2位点并且表达量增高.结论:以pCP20质粒为载体,通过同源重组等技术,可高效构建白念珠菌FLO8基因高表达菌株.
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融合PCR结合同源重组技术敲除白色假丝酵母菌FLO8基因
目的 运用融合PCR和同源重组技术敲除白色假丝酵母菌FLO8基因,并初步分析敲除菌株药物敏感性(药敏)情况.方法 运用融合PCR将FLO8基因的上下游片段与筛选标记融合在一起构成同源敲除组件,再用高效醋酸锂转染法将敲除组件转染入白色假丝酵母菌SN152,在营养缺陷板上进行筛选,通过2次同源重组敲除FLO8的2条等位基因.采用点板法比较FLO8未敲除株与敲除株药敏情况.结果 成功构建白色假丝酵母菌SN152 FLO8双等位基因缺失株,且耐药性FLO8-/-＞ FLO8+/-＞ SN152.结论 融合PCR结合同源重组技术能高效、快速构建白色假丝酵母菌FLO8基因缺失株,白色假丝酵母菌FLO8基因与药敏相关,且FLO8拷贝数越少耐药性越强.
