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水动力转染文献资料
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荧光素酶报告基因标记的HBV小鼠模型的建立
建立萤火虫荧光素酶(Fluc)为报告基因标记的乙型肝炎病毒(HBV)小鼠模型.通过水动力转染10 μg质粒pGL3-CP-Fluc-HBV1.2分别导入C57BL/6和BALB/c小鼠肝细胞内,定期取血检测HBsAg和HBV-DNA水平,活体成像检测Fluc在小鼠的表达.在BALB/c小鼠中,血清HBsAg表达水平在转染后第1 w内迅速升高,随后快速下降.而在C57BL/6小鼠中,HBsAg表达水平下降较缓慢.血清病毒滴度在转染后第1d平均达到3.89×104 copy/ml,在第4d和第7d达到高,分别为1.61×10 5和1.31×105copy/ml,随后开始下降,在转染的第70 d仍维持在103 copy/ml以上.免疫组化检测C57BL/6小鼠肝脏HBcAg的表达,结果显示在转染后第3 d HBcAg高水平表达,第135 d HBcAg仍有表达,但表达水平降低.活体荧光成像实时检测小鼠肝脏Fluc,结果表明两组小鼠均能持续高水平表达Fluc,转染后第7周Fluc的表达量仍然超过106 photon/s.我们建立的报告基因标记的HBV小鼠模型能够稳定表达HBV标志物和Fluc,为进一步进行HBV的疫苗评价提供了基础.
