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激光照射对C57黑鼠膝骨关节炎软骨及热休克蛋白70的影响
目的：观察不同波长激光照射C57黑鼠的犊鼻穴对骨关节炎模型关节软骨损伤的作用及对热休克蛋白70表达的影响。方法：C57黑鼠共60只分为6组，每组10只。其中1组为正常对照组，其余5组接受负荷训练。在电动跑台上进行1周的适应性训练后，以5 m/min的速度连续训练50 m，并人工驱赶保持其运动状态，每日1次，持续进行6周，以引发小鼠骨关节炎。造模成功后，除模型对照组和假治疗组外，其余3组每天分别接受10.6μm激光、650 nm激光及二者的复合激光分别照射犊鼻穴，Mankin评分评定小鼠的软骨退化情况，免疫组织化学荧光染色检测热休克蛋白70在小鼠关节软骨的表达情况。结果：模型对照组及假治疗组的关节软骨Mankin评分高于正常对照组(P＜0.01)，复合激光组的关节软骨Mankin评分明显低于模型对照组(P＜0.01)。与正常组比较，复合激光组、10.6 μm激光组、650 nm激光组、假对照组及模型对照组关节软骨的热休克蛋白70阳性表达均有增强，但复合激光组的热休克蛋白70阳性表达增强较其他组更为明显。结论：650 nm及10.6 μm和二者的复合激光针灸对膝关节软骨退变均有明显治疗效应，复合激光较单一激光更为明显。复合激光对关节软骨中热休克蛋白70阳性表达的增强亦较650 nm及10.6 μm单一激光明显。激光针灸对骨关节炎的治疗效应可能与热休克蛋白70的表达有关。10.6 μm与650 nm激光具有协同作用。
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塞来昔布联合热疗对胰腺癌细胞生长协同抑制作用的实验研究
目的 体外研究选择性环氧合酶2抑制剂塞来昔布联合热疗对人胰腺癌SWl990细胞的协同抑制作用.方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法研究热疗、塞来昔布及联合应用时对细胞增殖的抑制作用.电镜和流式细胞仪下检测不同处理因素对细胞凋亡和细胞周期的影响.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测bax、p16、p27Kip1、热休克蛋白(HSP)70的表达.Western印迹法检测HSP70蛋白的表达.结果 MTT法示热疗组、塞来昔布组、联合组的细胞存活率分别为56.63%、44.55%、21.83%.电镜、流式细胞仪检测结果示三种作用均可诱导细胞凋亡,联合组、塞来昔布组、热疗组及对照组凋亡比例分别为33.32%、17.33%、11.78%、6.66%,联合组对细胞周期的阻滞作用明显.RT-PCR示各处理组中p27Kip1、bax表达明显上调,尤以联合组为明显;p16、HSP70在热疗组和联合组中表达明显上调;Western印迹法示HSP70在各组细胞中都有表达,但在热疗组和联合组中表达更强.结论 塞来昔布联合热疗对胰腺癌Sw1990细胞生长具有协同抑制效应.两者联用可能通过上调HSP70、bax、p16和p27Kip1的表达诱导细胞凋亡和细胞周期停滞.
关键词： 胰腺癌 环氧合酶-2抑制剂 HSP70热休克蛋白 -
结核杆菌热休克蛋白70作为表位肽载体体外诱导 HBV 特异性免疫应答
目的：在体外研究结核杆菌热休克蛋白70（TB ．HSP70）作为乙型肝炎病毒（HBV）核心抗原（HBcAg）细胞毒性T 淋巴细胞表位肽载体，诱导 HBV 特异性免疫应答。方法应用毕赤酵母分泌表达 HSP70（P1）、HSP70-HBcAg （18-27）（P2）、HSP70-PreS2B （18-24）-PreS2Th（37-53）-HBcAg（18-27）（P3），用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹法鉴定各重组蛋白的表达。体外考察重组蛋白（P1、P2、P3）对慢性乙型肝炎外周血来源的树突状细胞和淋巴细胞的作用，流式细胞术评估树突状细胞的成熟，酶联免疫吸附测定法检测细胞因子白细胞介素（IL ）-12p70、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（T N F-α）、干扰素-γ（IFN-γ）分泌情况，TdR-3H掺入法检测淋巴细胞的增殖情况，应用经典51 Cr法检测重组蛋白诱导 HBV特异性细胞毒活性。结果重组蛋白P1、P2、P3构建成功，P1、P2、P3能诱导树突状细胞成熟，上调 CD1a、CD40、CD86表达，释放 T h1型细胞因子 IL-12p70、IL-1β和 TNF-α，P3能有效激活自体淋巴细胞成为细胞毒活性细胞，促进淋巴细胞增殖和IFN-γ的释放，而单独的HSP70无杀伤活性。结论 TB ．HSP70可作为HBV HBcAg细胞毒性T 淋巴细胞表位肽载体，提高T 淋巴细胞表位肽的免疫原性，且含有B、T h表位的P3能更好地激活HBV特异性免疫应答。
关键词： HSP70热休克蛋白 T淋巴细胞 乙型肝炎病毒 树突细胞 -
炎调方对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织热休克蛋白70mRNA和p38丝裂原活化蛋白激酶的影响
目的 探讨炎调方对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织热休克蛋白70 (HSP70) mRNA和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的调控作用.方法 将清洁级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、炎调方(生药量9.9 g/kg)组、谷氨酰胺组、槲皮素组,采用盲肠结扎穿孔术法(CLP)建立脓毒症ALI模型.观察大鼠一般状况,各组分别于术后4、6、8、10、12、18、24 h采集肺组织标本,HE染色观察肺组织病理学改变;实时荧光定量PCR法检测肺组织HSP70 mRNA的表达水平;Western Blotting法检测肺组织p38 MAPK的蛋白表达水平.结果 炎调方组、谷氨酰胺组大鼠与模型组比较,术后不同时间点的精神状态、活动量等明显好转,可见少量稀便;肺组织损伤程度明显减轻,腔内出血较少,肺实变较轻.炎调方组不同时间点的肺组织HSP70 mRNA表达水平显著高于假手术组、模型组(除24 h时间点外)、槲皮素组(P＜0.01),在8、12、18、24 h时间点显著低于谷氨酰胺组(P＜0.01);炎调方组不同时间点的肺组织p38MAPK的蛋白表达量显著低于模型组、槲皮素组(P＜0.01),在4、6、10h时间点明显低于谷氨酰胺组(P＜0.05、0.01).结论 炎调方可通过上调肺组织HSP70-mRNA的表达,下调肺组织p38 MAPK的蛋白表达,改善肺组织损伤,对脓毒症ALI发挥保护作用.
关键词： 炎调方 脓毒症 急性肺损伤 HSP70热休克蛋白 p38丝裂原活化蛋白激酶
