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GP73基因文献资料
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高尔基体糖蛋白GP73基因的构建、表达及鉴定
目的 重组及表达人高尔基体糖蛋白73( GP73)的融合蛋白,为建立一种新的肝癌诊断方法奠定基础.方法 提取转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞(293细胞)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出GP73基因,将其分别与带有HIS标签的PET-32a及GST标签的PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆并测序鉴定.进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,终在BL21菌中表达GP73融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 293细胞株提取的RNA经RT-PCR、PCR扩增后得到一条255 bp的DNA片段,经测序鉴定为GP73基因序列；并在大肠杆菌中实现了可溶性高表达,Western blot鉴定为GP73融合蛋白.结论 采用原核表达方法可获得高纯度的GP73融合蛋白,为进一步开发GP73诊断试剂打下基础,为肝癌的诊断开辟新途径.
