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改良BIGH3对角膜上皮细胞迁移的实验研究
目的 研究比较改良前后重组人BIGH3对人角膜上皮细胞迁移的影响.方法 培养人角膜上皮细胞,取同一代细胞进行实验;促细胞迁移实验采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验,下槽液体用含不同浓度(10,20,30,100 μg/mL)的野生或诱变BIGH3蛋白的KSFM培养液,2%BSA作为对照组,上槽加入0.4 mL密度3.5×10~5cells/mL的细胞悬液(细胞总数为1×10~5).置于37 ℃二氧化碳培养箱,温育4 h后酒精固定、Toludine篮染色、压片固定.用倒置相差显微镜,计算膜上相对固定区域的9个高倍视野(×400)的细胞数,取均值.结果 诱变型重组人BIGH3比野生型BIGH3拥有更高的促角膜上皮细胞迁移作用,以剂量依赖式方式促进人角膜上皮细胞的黏附.在10 μg /mL时,诱变型重组人角膜上皮素即可促进人角膜上皮细胞黏附,随着浓度的增高,作用增强;浓度达到30 μg /mL时,促进作用达到高峰.结论 诱变型人BIGH3比野生型BIGH3拥有更高的促角膜上皮细胞迁移作用,为进一步临床应用提供了理论基础.
