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B 和 T 淋巴细胞衰减因子激活在休克／脓毒症诱导的急性肺损伤中的作用
目的：探讨B和T淋巴细胞衰减因子（ B and T lymphocyte attenuator ， BTLA）激活在休克／脓毒症诱导的急性肺损伤（ ALI）中的作用。方法24只雄性C57BL／6小鼠随机平均分为三组：对照组、ALI模型组和6A6（BTLA激动性抗体）干预组。采用Western blot 观察对照组和ALI模型组肺组织BTLA蛋白的表达变化，并测定和比较三组小鼠支气管肺泡灌洗液蛋白浓度， ELISA方法测定肺组织促炎症细胞因子、趋化因子水平及肺组织髓过氧化物酶活性，TUNEL染色评估肺组织细胞凋亡情况；肺组织切片HE染色了解肺组织病理学改变。另外45只小鼠随机平均分为如上三组观察10 d生存率。结果 BTLA在ALI模型组肺组织中表达较对照组明显升高。与ALI模型组比较，6A6干预组小鼠支气管肺泡灌洗液蛋白浓度升高，肺部TNF－α和MIP－2、MCP－1水平升高，肺组织MPO活性增加（P均＜0.05）。 TUNEL染色显示，6A6干预组小鼠肺细胞凋亡较ALI模型组增加。 HE染色显示，6A6干预组较ALI模型组小鼠肺组织病理学形态损伤加重。6A6干预组较ALI模型组小鼠死亡率显著升高。结论 BTLA在休克／脓毒症诱导的ALI肺组织中表达升高。 BTLA激活使脓毒症诱导的ALI小鼠肺通透性增高，肺部炎症因子和趋化因子水平升高，肺部中性粒细胞募集增加，肺细胞凋亡增加，肺组织病理学形态损伤加重，导致ALI小鼠死亡率增加。
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慢病毒介导 BTLA 转染未成熟树突状细胞的研究
目的：探讨构建携带B和T淋巴细胞衰减因子（BTLA）基因的慢病毒载体转染未成熟树突状细胞（DC）的可行性。方法根据 GeneBank 公布的小鼠 BTLA 的 mRNA 序列构建 ORF 慢病毒表达质粒，合成 BTLA 基因的重组慢病毒载体。原代分离培养 CL57／BL 小鼠骨髓来源的未成熟DC，用包含 BTLA 基因的重组慢病毒载体以感染复数为15转染至未成熟 DC。采用免疫荧光、反转录PCR 检测 BTLA 基因的表达。结果成功构建有活性的慢病毒载体 LPP-Mm26645-Lv203-400，慢病毒滴度为3．25×109 TU ／ml。以重组慢病毒 LPP-Mm26645-Lv203-400转染未成熟 DC 96 h 后在荧光倒置显微镜下可观察到被感染的阳性细胞有绿色荧光蛋白表达，反转录 PCR 检测到感染的 DC 中 BTLA 基因的表达量比未感染的 DC 的表达量高（P ＜0．05），提示转染成功。结论构建携带 BTLA 基因的慢病毒载体可成功转染 BTLA 至小鼠骨髓来源的未成熟 DC。
关键词： B和T淋巴细胞衰减因子 慢病毒 树突状细胞 基因转染 -
哮喘与感染患儿外周血中性粒细胞CD64指数、B淋巴细胞、BTLA的表达差异及临床意义研究
目的 研究哮喘与细菌感染患儿外周血中性粒细胞CD64指数、B淋巴细胞、B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的表达差异及其作用机制.方法 选取皖南医学院弋矶山医院儿科2015年6月至2017年1月收住入院的49例患儿,其中3～6岁哮喘患儿26例(哮喘组),同期一般细菌感染患儿为23例(感染组).两组受试对象在性别、年龄及体质量上差异均无统计学意义(P＞0.05).住院后24 h内收集两组清晨空腹外周静脉血,应用流式细胞术检测外周血中性粒细胞CD64指数和B淋巴细胞水平及其BTLA表达水平,散射比浊法测定血清IgE水平,免疫透射比浊法测定血清CRP水平.结果 哮喘组外周血中性粒细胞CD64水平高于感染组(P＜0.05).哮喘组B淋巴细胞百分比高于感染组(P＜0.05);哮喘组B淋巴细胞表面BTLA表达较感染组减少(P＜0.01);哮喘组B淋巴细胞百分比与其表达BTLA成正相关(r=0.569 8,P＜0.01).哮喘组外周血清CRP水平较感染组低(P＜0.05).哮喘组外周血清IgE水平较感染组显著升高(P＜0.01).结论 感染是哮喘的诱发因素之一,CD64、CRP的早期检测可指导哮喘患儿抗菌药物的应用.BTLA在哮喘患儿B淋巴细胞表达下调,参与免疫应答的调控.
