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不同浓度阿霉素对A549细胞存活影响的机制研究
目的:探讨在不同浓度阿霉素作用下,肺癌细胞株A549存活率发生反向变化的可能机制.方法:在阿霉素作用于A549细胞24小时后,采用MTT法检测细胞存活情况的变化;用实时定量RT-PCR和蛋白印迹法测定survivin的mRNA和蛋白水平表达;免疫印迹检测p21蛋白表达水平,以及流式细胞术检测药物作用后细胞周期变化.进一步用羟基脲阻滞细胞分化于G1期,观察阿霉素对细胞的作用情况.结果:在不同浓度梯度的阿霉素作用下(由低至高),细胞存活率出现先下降后上升的反弹趋势(P＜0.01),并伴随survivin分子的高表达,同时,药物作用下细胞分化更倾向阻滞于GI期.结论:高浓度阿霉素作用下细胞分化多阻滞于G1期,并诱导出现survivin分子的高表达,从而增强了对细胞的保护作用是细胞存活率反向升高的可能原因.
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人外周血γδT细胞对肺癌细胞杀伤作用的研究
目的:探讨人外周血扩增的γδT细胞对肺腺癌细胞A549的杀伤作用.方法:取健康人外周血分离单个核细胞,置于RPMI1640培养基(含100 ml/L小牛血清,50 mL/L人AB型血清,IPP 2μg/L,IL-2 105 IU/L)中培养扩增γδT细胞,用流式细胞仪检测γδT细胞的纯度.用扩增后的γδT细胞与肺腺癌细胞A549按不同效靶比例孵育,用乳酸脱氢酶释放法进行细胞毒活性测定.结果:人外周血单个核细胞经过培养扩增γδT细胞可以达到较高的纯度.人外周血γδT细胞对人肺腺癌细胞A549有较强的杀伤活性,其杀伤活性与效靶比和效应细胞的纯度呈正相关.人外周血γδT细胞对靶细胞的杀伤活性要高于CIK细胞.结论:人外周血扩增的γδT细胞对肺腺癌细胞A549有较强的杀伤作用.
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TNFα联合VP16对肺腺癌细胞株抑制、粘附分子表达及细胞周期的影响
目的研究肿瘤坏死因子(TNFα)和足叶乙甙(VP16)联合对肺癌细胞包株的作用及其机制.方法用MTT法检测不同浓度的TNFα、VP16及TNFα联合VP16对人肺癌细胞系A549的细胞毒作用以及用间接荧光标记法、流式细胞仪观察TNFα、VP16及TNFα联合VP16对A549的细胞周期、粘附分子表达的影响.结果 TNFα、VP16对A549细胞的生长抑制作用有剂量依赖关系,而TNFα联合VP16对A549抑制作用较TNFα、VP16作用显著(P＜0.01).TNFα、TNFα联合VP16能上调CD54表达,与VP16均能上调CD95表达,而粘附分子CD11α、CD18、CD40、CD80、CD137等用药后仍不表达.对细胞周期用药后G2期明显下降(13.2%下降至3.0%),S期上升(27.3%上升至42.5%).结论 TNFα联合VP16增加A549的抑制率,增强CD54、CD95表达.推测TNFα联合VP16对A549细胞的作用是通过抑制DNA合成及有丝分裂,使G0+G1+S期不能及时转至G2、M期并促进肺癌细胞凋亡.
关键词： 肿瘤坏死因子α 足叶乙甙(VP16) 肺癌细胞株A549 细胞周期 粘附分子 -
miR23a促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制
目的 研究miR23a通过JNK信号通路促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制.方法 利用脂质体转染试剂Lipo2000将mi23a转染到肺癌A549细胞,实时荧光定量PCR (Real-time PCR,RT-PCR)法检测阴性对照(NC)组和转染mi23a组细胞中miR23a的表达;划痕实验检测肺癌细胞株A549的迁移能力;Western blotting法检测JNK通路中p-JNK水平的变化;RT-PCR法和Western blotting检测肺癌细胞株A549转染miR23a后细胞凋亡蛋白Caspase-3的mRNA和蛋白质水平的表达.结果 Real-time PCR结果显示,转染miR23a组其miR23a表达水平显著高于阴性对照(NC)组(P＜0.05),A549细胞转染miR23a后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,转染miR23a组中p-JNK和Caspase-3的水平均有明显升高(P＜0.05).结论 miR23a可通过活化JNK信号通路,进而促进肺癌A549细胞中细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达,从而抑制其肿瘤细胞的增殖和扩散能力.
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蚌肉提取物LX01对肺癌细胞株A549的抑制作用
目的观察蚌肉提取物LX01对肺癌细胞株A549的抑制作用及对血液白细胞数目的影响.方法MTT法检测不同浓度的LX01对肺癌细胞株A549细胞增殖的抑制率;A549细胞接种BALB/C裸鼠,观察给药后肿瘤的生长情况,高、中、低剂量LX01对荷瘤小鼠的生存时间、瘤重及血液白细胞数目的影响.结果LX01对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,IC50为56.85mg/L,与阴性对照组比差异有显著性(P＜0.01);LX01能剂量依赖性的抑制A549接种瘤的生长;LX01中、高剂量可明显延长A549荷瘤小鼠生存时间,高剂量组荷瘤瘤重明显减轻,与阳性对照药环磷酰胺相似,明显高于阴性对照组(P＜0.01);与5-FU治疗组相比,LX01各剂量组对A549荷瘤小鼠血白细胞数目无降低作用.结论蚌肉提取物LX01能显著抑制肺癌细胞株A549接种BALB/c裸鼠后的生长,且对免疫系统无明显抑制作用.
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脐血来源树突状细胞增强CIK细胞对肺癌细胞株的杀伤作用
目的探讨肺癌细胞株A549肿瘤冻融抗原负荷脐血来源树突状细胞(DCs)与CIK细胞混合培养后对A549细胞杀伤活性的影响作用.方法取对数生长期的A549细胞制备肿瘤抗原(Ag),用脐血单个核细胞(CBMC)分别制备DCs和CIK细胞;用负荷Ag的DCs和CIK细胞共培养,诱导Ag-DC-CIK细胞.用流式细胞术检测DC免疫表型,MTT法检测CBMC、CIK、Ag-CIK和Ag-DC-CIK对A549肿瘤细胞株的杀伤活性.结果脐血DCs高表达CD86、CD40,中度表达CD8 3和CD80,低表达CD11c.实验组细胞(Ag-DC-CIK)对A549细胞的杀伤能力(62%)明显高于对照组(P＜0.01),结论肿瘤抗原负荷的DCs能增强CIK细胞对靶细胞的杀伤活性,为DCs的免疫治疗提供了新的思路.
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p16与非小细胞肺癌临床病理的关系及5-Aza-CdR对肺癌A549细胞中p16表达的影响
目的 探讨抑癌基因p16在非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)组织中的表达与临床病理参数间的联系,进一步研究DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)在人肺癌A549细胞中对p16表达的影响.方法 采用免疫组化SP法检测76例NSCLC组织及其癌旁正常组织中p16蛋白的表达情况,并分析不同病理参数癌组织中p16蛋白表达的差异;采用MSP法检测不同浓度(0～16 μmol/L) 5-Aza-CdR处理后的A549细胞中p16基因启动子区DNA的甲基化状态,并采用Western blot法检测5-Aza-CdR对A549细胞中p16表达的影响.结果 76例NSCLC组织中,32例(42.11％)p16蛋白表达阳性,低于癌旁正常组织(59例,77.63％)中阳性表达(P＜0.05);不同病理组织分级、肿瘤分化程度、临床TNM分期及有无淋巴结转移的NSCLC组织中p16的阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.05);在A549细胞中p16蛋白表达和非甲基化产物均呈低表达状态,5-Aza-CdR作用后,p16蛋白和其非甲基化产物表达均上调,且随着5-Aza-CdR浓度的升高呈增多趋势.结论 p16在鳞癌、低分化、有淋巴结转移及Ⅲ～Ⅳ期NSCLC组织中低表达,提示其失活可能与NSCLC的进一步进展有关,5-Aza-CdR可诱导A549细胞中p16蛋白和非甲基化产物表达增加.
关键词： 非小细胞肺癌 p16基因 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 肺癌细胞株A549
