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T7E1 assay文献资料
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利用CRISPR系统介导人类mir-505基因位点的编辑
目的:通过针对人源mir-505基因,设计不同sgRNA,从而利用CRIPSR系统对mir-505基因位点进行编辑,并探讨CRISPR系统对靶点的剪切效率的影响因素.方法:针对人源mir-505基因设计两条具有不同GC％的sgRNA,随后分别将其构建入41824-sgRNA表达载体和42230-Cas9蛋白/sgRNA共表达载体,并将表达载体利用脂质体转染法转染入人类细胞,通过T7E1assay检测不同CRISPR系统对靶点剪切效率的影响.结果:对靶点的剪切与Cas9蛋白和sgRNA的剂量成正比;当sgRNA与Cas9蛋白共传递时,也能够明显提高靶点的剪切效率;而较低的sgRNA的GC％会降低其对靶点的剪切效率.结论:本研究利用CRISPR系统靶向人源细胞的mir-505基因,使得mir-505基因发生突变.CRISPR系统对靶点的剪切效率和sgRNA和Cas9蛋白的剂量、sgRNA是否和Cas9蛋白共传递以及sgRNA的GC％有关.
关键词： CRISPR系统 miR-505 sgRNA T7E1 assay 剪切效率
