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节律基因CRY1在肝癌中的表达及对肝癌细胞生长的作用
目的:探讨节律基因CRY1(cryptochrome circadian clock 1)在肝癌组织中的表达情况及对肝癌细胞生长的作用.方法:利用实时荧光定量PCR、Western blotting及免疫组织化学染色法,检测CRY1在肝癌组织及细胞中的表达;利用肝癌公共数据信息,分析和验证CRY1在肝癌组织中的表达;真核表达质粒将肝癌细胞CRY1过表达后,采用MTS和Annexin V-FITC/PI双染法,分别检测CRY1对细胞增殖和凋亡的影响.结果CRY1在癌组织中阳性率为57.5％(23/40),癌旁组织中阳性率为87.5％(35/40),癌中CRY1表达低于癌旁的占80％(32/40),与癌旁组织比较,CRY1蛋白在肝癌组织中的表达明显降低,差异有统计学意义(t=7.53,P＜0.001).CRY1在3个肝癌公共数据信息显示,与对应癌旁组织相比,其在癌组织中表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(TCGA:413.62 vs 335.17,P=0.0155;GSE22058:397.67 vs 360.08,P=0.0207;GSE25097:1.627 vs 1.433,P＜0.0001).同时CRY1在被检测的4株肝癌细胞系中表达也显著低于永生化的正常肝细胞.与对照组比,过表达CRY1组细胞增殖能力明显降低,两组间差异有统计学意义(1.100 vs 0.662,P＜0.0001);与对照组比,过表达CRY1组细胞凋亡显著增加(凋亡细胞百分比:7.9 vs 17.5,P=0.0014).结论:节律基因CRY1在肝癌中低表达,同时CRY1抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡.
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CRY1基因单核苷酸多态性与乳腺癌风险的关联研究
背景与目的:隐花色素-1(cryptochrome-1,CRY1)基因属于生物钟基因家族,它早在植物体内发现,是生物钟基因负反馈环的主要部分.近年来生物钟基因多态性与乳腺癌易感性的关系引起国内外研究者的广泛关注,本研究探讨生物钟基因CRY1的单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的关系.方法:采用TaqMan 单核苷酸多态性分型技术检测1 523例中国汉族女性乳腺癌患者和1 599名正常女性对照者CRY1基因rs1056560位点的基因型,采用SPSS 16.0软件进行数据处理.结果:CRY1基因rs1056560位点三种基因型(TT/GT/GG)在乳腺癌患者和对照间的分布差异具有显著性(x2=6.394,P=0.041),与TT基因型相比,GT基因型可以显著降低乳腺癌的发病风险(OR=0.743,95%CI:0.580～0.951),携带至少一个G等位基因(GT/GG)的个体乳腺癌风险降低23.2%(OR=0.768,95%CI:0.606～0.971).分层分析后发现,rs1056560 T＞G保护作用在绝经后妇女、初潮≥13岁、初孕≥25岁、无肿瘤家族史者、无乳腺良性病史及流产0～1次妇女中尤为显著.结论:CRY1基因rs1056560 T＞G单核苷酸多态性与中国人群乳腺癌的发病风险相关,这一结论有待于不同种族人群的关联研究以及功能学研究的进一步证实.
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缺氧环境下基因CRY1表达与大鼠肝细胞BRL-3A凋亡的关系
目的 观察模拟缺氧条件下大鼠BRL-3A细胞中基因CRY1与细胞凋亡及NF-Kappa B凋亡信号通路的关系. 方法 通过氯化钴体外模拟缺氧环境,观察大鼠肝BRL-3A细胞CRY1蛋白表达;筛选、构建CRY1mRNA慢病毒干扰载体,对BRL-3A细胞CRY1mRNA表达进行敲减,利用Western Blot法对BRL-3A细胞中CRY1干扰效能进行观察,并观察缺氧条件下转录因子CRY1敲减后BRL-3A细胞凋亡、NF-Kappa B、Caspase3蛋白表达. 结果 梯度浓度氯化钴模拟缺氧条件下BRL-3A细胞中CRY1表达随氯化钴浓度增加,表达逐渐下调;成功构建CRY1mRNA干扰载体pLenti6.3-EGFP-rCRY1-miR,有效敲减BRL-3A细胞中CRY1mRNA和蛋白表达,在100μM氯化钴模拟缺氧条件下YY1敲减后NF-KappaB、Caspase3蛋白表达增加,凋亡持续增加. 结论 缺氧致大鼠BRL-3A细胞中转录因子CRY1表达下调,并通过NF-KB凋亡信号通过激活诱导细胞凋亡.
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生物钟基因Cry1在消化道腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系
目的：探讨生物钟基因Cry1在消化道腺癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组织化学法检测生物钟基因Cry1在63例消化道腺癌组织和对应癌旁组织中的表达，分析两者之间的关系以及Cry1的表达与临床病理特征之间的关系。结果：生物钟基因Cry1在63例消化道腺癌组织和对应癌旁组织中表达强度无显著相关性（P＞0．05），Cry1的高表达与肿瘤的低分化相关（P＜0．05）；Cry1的表达定位在细胞核和细胞质中，癌组织和癌旁组织之间的亚细胞分布差异具有显著统计学意义（ P＜0．01）。结论：生物钟基因Cry1在低分化腺癌中的表达增高以及在癌组织中的亚细胞定位发生改变，提示Cry1蛋白定位在消化道腺癌的发生发展中可能发挥作用，Cry1的表达也可能与肿瘤的恶性程度有关。
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节律基因蛋白CRY1在食管癌及癌旁组织中的差异性表达及意义
目的:探讨节律基因Cry1表达的CRY1蛋白在食管癌中的表达及其与临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测40例食管癌组织,40例癌旁组织中CRY1的表达.结果:40例食管癌组织中CRY1的弱阳/阳性表达(免疫组化染色强度评分大于等于2分)率为17.5％,而40例食管癌旁组织标本CRY1的阳性表达率为75％,两组表达的差异性具有统计学意义(P＜0.01).且表达强度与患者年龄、性别,肿瘤组织性质、侵及深度、淋巴结转移情况无明显相关性.结论:Cry1基因在正常组织中高表达,而在食管癌组织中低表达,可能作为一种抑癌基因影响肿瘤的发生发展.
