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不同方法制备大鼠肝脏脱细胞支架及其免疫原性研究
目的:肝脏脱细胞支架(decellularized liver bioscaffold,DLB)在组织工程研究中具有良好前景,但对DLB的免疫原性尚未见探讨.本研究利用不同方案制备大鼠DLB,检测支架成分和体内重塑反应,为制备出低免疫原性的DLB提供改进依据.方法:选取文献报道的三种方案(分别以SDS,Triton X-100和NP-40为主要洗脱成分),制备F344大鼠DLB,进行HE和Masson染色,检测DLB中DNA、氨基葡聚糖(GAG)以及羟脯氨酸(HYP)含量；再将DLB埋植于C57BL/6小鼠的背部皮下,于术后第3、7和14天取出后进行形态学观察和组织学评分.结果:三种方案均成功制备出符合脱细胞标准的大鼠DLB；形态学结果提示TritonX-100和NP-40方案较SDS方案能更好地保护肝脏超微结构；成分检测结果发现NP-40方案去除DNA的能力显著强于SDS和Triton X-100方案(P＜0.05),而对GAG含量的洗脱作用弱(P＜0.05)；异种体内埋置实验提示NP-40方案制备的DLB引起的免疫反应强度明显弱于SDS和Triton X-100方案,体内重塑结局评分显著高于SDS和Triton X-100方案.结论:与SDS和TritonX-100方案相比,NP-40方案能更有效地去除肝脏DNA,较好地保留GAG,诱导移植受体对DLB的良性重塑反应,为进一步的体内研究提供更优化的支架.
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脱细胞肝支架的结构和成分对细胞相容性的影响
目的 比较不同方法制备脱细胞肝支架(DLBS)的结构和成分以及细胞相容性,探讨其内部联系.方法 取50只成年F344大鼠肝脏,使用文献报道的3种方法[以十二烷基硫酸钠(SDS)、Triton X-100和NP-40为主洗脱剂]制备大鼠DLBS.进行扫描电镜和孔径计算和氨基葡聚糖(GAG)检测.后经门静脉灌注肝卵圆细胞,进行黏附率、增殖情况、免疫荧光、扫描电镜以及白蛋白分泌检测.结果 大体观察、扫描电镜及孔径计算表明NP-40方案细胞外基质较SDS和Triton X-100方案整齐；GAG检测NP-40方案[(44.19±3.35) ng/mg]高于Triton X-100方案[(36.71±2.01) ng/mg]和SDS方案[(21.63 ±2.78) ng/mg]；细胞黏附率显示NP-40方案[(95.78±2.11)％]高于SDS方案[(84.18±3.30)％]和Triton X-100方案[(91.15±2.21)％]；细胞增殖情况Triton X-100方案和NP-40方案的细胞增殖速度显著高于SDS方案(P＜0.05)；白蛋白分泌NP-40方案[(85.77±3.30) mg/106个细胞]明显好于SDS方案[(49.37±2.43) mg/106个细胞]和Triton X-100方案[(74.66 ±4.80) mg/106个细胞].结论 DLBS的结构和成分对支架的细胞相容性具有明显的影响,同时也明显观察到NP-40方案较SDS和Triton X-100方案在制备DLBS的优势.
