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煮沸裂解法和试剂盒法提取浸矿菌基因组DNA的比较
目的:在生物浸出中,微生物群落结构分析有着重要意义,而群落分析的基础是提取纯度高、损失少的基因组DNA.为了解决这一问题,本实验通过比较两种较常用的DNA提取方法,煮沸裂解法和试剂盒法,寻找一种灵敏、快速、经济实用的制备浸矿细菌基因组DNA的方法.方法:分别用煮沸裂解法和试剂盒法提取6种浸矿菌的基因组DNA,从所提取的基因组DNA浓度、纯度、回收率和对PCR扩增反应的影响方面比较了两种方法的提取效果;用两种方法来处理不同浓度梯度的一种菌,通过实时定量PCR来比较两种方法的灵敏性.结果:相同处理量(108个)的革兰氏阳性菌(1株)、革兰氏阴性菌(4株)、古菌(1株)经两种方法提取的基因组DNA差异较大,煮沸裂解法所得的6组基因组DNA更纯,其OD260/OD280的值更接近1.8-2.0(纯DNA的OD260/OD280在1.8-2.0之间),前者所提DNA回收率大可达后者的16.7倍;煮沸裂解法只需较少菌(102个)便能让实时定量PCR检测到所提DNA模板浓度,比试剂盒法灵敏.结论:两种方法提取的基因组DNA均可用于后续的PCR扩增,此外,前者提取的DNA浓度随细菌浓度增加而呈线性增大,而后者随菌浓度增大,所提DNA量增加有限,因此,在生物浸出中微生物基因组DNA的提取可直接采用简单快速的煮沸提取法,为实验节约成本和时间.
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煮沸裂解法与磁珠法在 HBV DNA 荧光定量检测中的核酸提取效果
目的：比较煮沸裂解法和磁珠法在 HBV DNA 荧光定量 PCR 检测中的核酸提取效果。方法应用煮沸裂解法与磁珠法对不同拷贝数（＜103、103、104、105、106和107拷贝/ mL）HBV DNA 样本进行核酸提取，并采用荧光定量 PCR 检测结果进行评价。结果磁珠法的核酸提取效果优于煮沸裂解法，尤其在低拷贝样本中，明显优于煮沸裂解法约10倍（P ＜0.05）；磁珠法的重复性高于煮沸裂解法；磁珠法提取核酸时，样本只要1～32个，提取时间不随样本量变化。结论磁珠法的核酸提取效果好于煮沸裂解法，尤其在低拷贝数样本中；且重复性较高。
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煮沸裂解法快速提取Tg2576小鼠DNA
目的 建立Tg2576小鼠DNA快速简便高效的提取方法.方法 借鉴煮沸裂解法制备质粒DNA方法,改进后用于提取Tg2576小鼠DNA,比较酚/氯仿法和煮沸裂解法两种提取DNA的方法.结果 在小鼠鉴定过程中,使用酚/氯仿法和煮沸裂解法提取DNA均能取得满意的结果；但前者操作繁琐,至少需2d完成,而后者操作步骤大大简化,可在1d内完成,且提取所用试剂毒性小、成本低.结论 煮沸裂解法提取DNA灵敏度高、耗时短、操作简便,值得在Tg2576小鼠基因型鉴定中使用,也可以在其他转基因动物鉴定实验中推广.
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煮沸裂解法快速提取大鲵DNA
目的 建立大鲵基因组DNA快速简便高效的提取方法.方法 借鉴煮沸裂解法制备质粒DNA方法,改进后用于提取大鲵基因组DNA.结果 本方法提取DNA纯度高(A260/A28介于1.7～2.1之间),耗时短(2h),毒性小,分子大小约为23kb,适用于PCR扩增及后续分析.结论 本方法提取基因组DNA纯度高、耗时短、提取所用试剂毒性小、成本低,值得在大鲵基因组DNA提取中使用,也可为其他动物的相关研究提供参考.
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两种核酸提取方法对血清HBV-DNA定量检测的影响
目的比较二氧化硅吸附法与简易常用的煮沸裂解法提取样本核酸的差异,选择可靠的检测HBV-DNA提取方法.方法运用推荐的二氧化硅吸附法与简易常用的煮沸裂解法分别提取血清样本核酸模板,应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA.结果共80例HBsAg阳性患者血清,二氧化硅吸附法检测其中有55例HBV-DNA阳性(＞1000拷贝/ml定性为阳性),煮沸裂解法检测出41例阳性(均在上述55例中);两法都没有检测到25例(＜1000拷贝/ml).比较41例两法都检测出的HBV-DNA定量(拷贝数/ml)对数换算值,二氧化硅吸附法(-x±s)为7.124±1.282,煮沸裂解法为5.198±1.311.统计分析表明,两种方法定性检出率差异明显:阳性符合率100%,阴性符合率64.1%,x2=12.07、P＜0.005;定量检测值也具显著性差异,相关分析Y=0.947 7X+2.200 6,r=0.969 1,P＜0.005;另外,对比10次重复提取核酸后HBV-DNA检测,二氧化硅吸附法的重复性(以CV计)4.24%明显优于煮沸裂解法11.4%.结论煮沸裂解法提取核酸模板虽然操作简单,但重复性、阳性检出率与检测值均较二氧化硅吸附法低,直接影响临床对HBV感染的诊断、冶疗以及疗效判断.建议弃用煮沸裂解法用以检测HBV-DNA.
关键词： 二氧化硅吸附法 煮沸裂解法 核酸模板 HBV-DNA定量对比分析
