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ADV-miR-184体外转染对人晶状体上皮细胞移行的影响
目的 探讨携带miR-184的重组腺病毒(ADV-miR-184)体外转染对人晶状体上皮细胞移行的影响.方法 ADV-miR-184在293细胞中扩增、纯化并滴定病毒滴度;ADV-miR-184体外感染人晶状体上皮细胞(HLE-B3),采用细胞划痕法测定ADV-miR-184对HLE-B3移行距离的影响.结果 测定ADV-miR-184的病毒滴度为1.6×109 puf/mL;分别将ADV-miR-184以MO110、MO150、MOI100、MOI200、MOI500转染HLE-B3 72 h后,细胞移行距离随着ADV-miR-184的浓度增加而减少,MOI100组与MOI50组、MOI10组相比有明显差异(P＜0.05).但与MOI200、MOI500实验组相比变化不明显.与对照组比较,MOI100感染细胞的移行距离在转染后24 h、48 h、72 h、96 h明显缩短(P＜0.05).结论 ADV-miR-184可成功转染人晶体上皮细胞,并可抑制细胞的移行,提示miR可能参与后发性白内障的形成过程.
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MiR-184通过MAPK信号通路促进多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞的增殖
目的:研究microRNA-184(miR-184)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)中的作用,并初步探讨其潜在的作用机制.方法:采用qRT-PCR检测24例PCOS卵巢组织标本、20例正常卵巢组织标本及人卵巢颗粒细胞KGN和人正常卵巢上皮细胞IOSE80中miR-184的表达情况.通过细胞转染法抑制KGN细胞中miR-184的表达,MTT法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Western印迹法检测细胞中p-p38 MAPK和p-ERK1/2蛋白表达水平.以终浓度为20μmol/L的MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580处理下调miR-184的KGN细胞,按照上述方法检测对细胞增殖的影响.结果:PCOS卵巢组织和KGN细胞中miR-184的表达显著上调.在KGN细胞中转染miR-184抑制剂可显著抑制miR-184的表达.下调miR-184的表达后,KGN细胞增殖和细胞克隆形成能力显著降低,细胞中p-p38 MAPK和p-ERK1/2蛋白表达水平显著下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).抑制剂SB203580处理下调miR-184的KGN细胞,细胞增殖和细胞克隆形成能力显著降低,与单纯下调miR-184的细胞相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论:MiR-184能够促进卵巢颗粒细胞的增殖,其作用机制与MAPK信号通路的激活有关,可为PCOS的治疗提供潜在的作用靶点.
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miR-184对小鼠神经干细胞增殖的影响及其机制
目的 观察miR-184对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖的影响及其机制. 方法 构建包装pHBLV-U6-GFP-miR-184基因过表达和PHBLV-U6-G FP-s h-mi R-184基因干扰慢病毒载体和各自对照无义序列慢病毒载体,分离培养孕14d的CD1胎鼠大脑侧脑室下区的NSCs并鉴定.实验细胞分为过表达对照组、miR-184过表达组、干扰对照组和miR-184干扰组,各组细胞在感染对应的慢病毒后,用嘌呤霉素进行抗性筛选.筛选后,继续培养细胞至3代,实时定量PCR进行miR-184过表达验证.通过targetScan、iRTarBase、miRanda等软件预测miR-184的靶基因并进行内源性验证,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)细胞渗入实验观察各实验组的增殖情况,通过Westernblotting实验和实时定量PCR观察各组Notch信号通路相关蛋白Hes1和Hes5及其mRNA的表达情况. 结果 免疫荧光染色显示,90％的分离培养细胞呈巢蛋白(nestin)和Y性别决定转录因子2(Sox2)双阳性,miR-184过表达组的miR-184表达量是过表达对照组的(67.63±7.53)倍,差异具有统计学意义(P＜0.05).Brdu细胞渗入实验结果显示与各自对照组比,miR-184过表达组的细胞增值率是过表达对照组的(1.47±0.05)倍,而miR-184干扰组的细胞增值率是干扰对照组的(0.84±0.03)倍,差异均具有统计学意义(P＜0.05).iRTarBase和miRanda软件预测,Numblike蛋白(Numbl蛋白)作为miR-184的潜在靶基因,miR-184可以下调Numbl蛋白的表达,miR-184过表达组和miR-184干扰组的Numbl相对表达量分别是各自对照组的(0.73±0.07)倍、(1.30±0.05)倍,差异均具有统计学意义(P＜0.05),但miR-184并不能改变Numbl mRNA的表达水平.miR-184可抑制Numbl蛋白的表达,使Notch信号通路的下游相关蛋白Hes1和Hes5及其mRNA表达升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05). 结论 miR-184通过在蛋白翻译水平抑制Numbl蛋白的表达,从而激活Notch信号通路,促进NSCs的增殖.
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miR-184在氧糖剥夺诱导SK-N-SH细胞缺血损伤中的作用及其对抗凋亡基因AKT2表达的调节
目的：探讨miR-184在氧糖剥夺（OGD）诱导SK-N-SH细胞缺血缺氧损伤中的作用及其对抗凋亡基因AKT2的调节。方法：应用RT-PCR检测miR-184在SK-N-SH细胞OGD后的表达情况，并瞬时转染miR-184的类似物、抑制物及其阴性对照，分别行RT-PCR检测miR-184和AKT2的表达，MTT染色检测细胞存活率。结果：与正常细胞相比，miR-184在OGD诱导的缺血损伤模型中表达下调（P＜0．05）；且过表达或抑制miR-184可显著改变AKT2的表达，影响缺血损伤细胞的存活率（P＜0．05）；而在非OGD作用下，miR-184对SK-N-SH细胞的活力无显著影响。结论：miR-184通过负性调节AKT2的表达水平，在OGD诱导的缺血损伤中发挥重要作用。
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血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中的表达水平及其诊断效能
目的 分析血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中的表达水平,及其对非小细胞肺癌的诊断效能.方法 选取非小细胞肺癌患者112例、肺炎患者60例、体检健康者40例作为研究对象,分别收集3组血浆标本,提取经纯化鉴定的血清外泌体中miRNA,采用QRT-PCR法检测3组血清外泌体miR-184的表达水平,利用ROC曲线评价血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中的诊断效能.结果 本研究纯化的样品中含有大量外泌体颗粒且具备既往报道的外泌体特性;3组血清外泌体miR-184的表达量,组间两两比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),且非小细胞肺癌患者血清外泌体miR-184表达量明显高于肺炎患者和体检健康者(P＜0.05);ROC曲线图下血清外泌体miR-184对非小细胞肺癌的诊断敏感性为92.54％,特异性为84.19％,其曲线下面积为0.913 [95％CI (0.726,1.031)].结论 血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中呈高表达,其临床诊断效能较高,可能成为非小细胞肺癌早期诊断的生物学标志物.
