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蛋白质泛素化降解途径
泛素系统(UPS)广泛存在于真核生物中,是精细的特异性的蛋白质降解系统.它由泛素、26S蛋白酶体、多种酶(如E1、E2、E3、去泛素酶)构成.在泛素系统中,泛素(Ubiquitin,Ub)是一种序列保守的小分子蛋白,蛋白质与泛素结合后,被蛋白酶体以ATP依赖的方式降解.E1、E2酶分别称为泛素活化酶和泛素载体酶,使泛素通过Ub-腺苷酸中间产物形成E2-Ub巯基酯.泛素连接酶E3负责连接泛素和特异性的底物,这样泛素化的底物可以被26S蛋白酶体降解为若干肽段.泛素系统通过特异性的降解蛋白质,调节细胞分化、免疫反应,参与转录、离子通道、分泌的调控及神经元网络、细胞器的形成等等,泛素系统还与人类某些疾病有关.现对泛素系统的成员、作用机制和功能的研究进展作一介绍.
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MG-132诱导Tca-8113细胞凋亡的机制探讨
目的:探讨内质网应激在蛋白酶抑制剂MG-132诱导人舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞凋亡中的作用.方法:使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基常规培养Tca-8113细胞,实验分为5组,3个实验组分别加入MG-132,终浓度为10.0、20.0、30.0μmol/L;阳性对照组加入毒胡萝卜素,终浓度为5.0μmol/L;阴性对照组加入1640培养液.培养24h后,Hoechst 33258 染色法观察凋亡细胞形态学变化:Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测GRP78 mRNA,Western 印迹检测caspase-12 蛋白的表达,ELISA 法检测人泛素蛋白连接酶E3浓度.应用SPSS16.0软件包对结果进行统计学分析.结果:MG-132作用Tca-8113细胞24 h后,细胞出现典型的凋亡形态;MG-132实验组细胞凋亡率随MG-132浓度升高而逐渐升高,存在浓度依赖性;MG-132 组 GRP78 的 mRNA 及caspase-12蛋白表达增强;MG-132 组人泛素连接酶E3的浓度分别为28.75±2.28、18.16±0.65、8.85±0.72.结论:MG-132可通过内质网应激途径诱导Tca-8113细胞的凋亡,MG-132可抑制人泛素连接酶E3的表达.
关键词： 泛素-蛋白酶体抑制剂 MG-132 内质网应激 Tca-8113细胞 凋亡 E3 -
妊娠早中期PAPP-A、AFP、E3和β-hCG对子痫前期的预测价值
目的:探讨子痫前期患者孕早期血清妊娠相关蛋白(PAPP-A)和孕中期人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、甲胎蛋白(AFP)、雌三醇(E3)的变化及其预测价值.方法:随机选21例轻度子痫前期患者(MPE)和19例重度子痫前患者(SPE)为研究组,79例正常孕妇(NP)为对照组,分析孕早期PAPP-A和孕中期AFP、E3、β-hCG水平.结果:MPE和SPE组β-hCG、AFP明显高于NP组(P＜0.05),MPE和SPE组PAPP-A明显低于NP组(P＜0.05),MPE和SPE组E3与NP组间比较无差异(P＞0.05),MPE和SPE组间的四项指标比较均无差异(P＞0.05).PAPP-A、AFP、β-hCG以及三种指标联合在MPE组得出的ROC曲线下面积分别为:0.649、0.628、0.634和0.737,在SPE组分别为:0.718、0.699、0.673和0.801.结论:子痫前期患者发病前血清PAPP-A、AFP、β-hCG有显著变化,三项指标联合对子痫前期有较高预测价值.
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保元解毒汤含药血清对肌细胞萎缩模型E3组分mRNA及蛋白表达的影响
目的:研究保元解毒汤含药血清对小鼠成肌细胞(C2C12)萎缩模型中E3组分Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白表达的影响,探讨保元解毒汤干预肌肉蛋白降解的作用机制.方法:制备保元解毒汤含药血清,高效液相色谱法(HPLC)定性检测含药血清中人参皂苷Rb1、绿原酸、阿魏酸、乌头碱.建立TNF-α诱导的肌细胞萎缩模型,实验分为正常对照组,TNF-α干预组,含药血清组.TNF-α及含药血清干预6h后,实时荧光定量PCR法检测肌细胞中Atrogin-1、MuRF-1mRNA表达.TNF-α及含药血清干预72h后,Westem blot法检测肌细胞中Atrogin-1、MuRF-1的蛋白表达.结果:HPLC结果显示含药血清中含有人参皂苷Rb1、绿原酸、阿魏酸、乌头碱.与正常对照组比较,水煎浓缩含生药量达2.76 g/ml时,TNF-α诱导组细胞中Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),与TNF-α诱导组比较,含药血清组细胞中Atrogin-1、MuRF-1mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论:保元解毒汤含药血清能显著降低Atrogin-1、MuRF-1mRNA及蛋白表达水平,提示保元解毒汤可能通过UPP信号途径抑制肌细胞萎缩,改善恶病质肌肉萎缩状态,可为临症治疗癌性恶病质提供新的治疗思路和有效方药.
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泛素连接酶组成型光形态建成蛋白1的生物学特性及其在肿瘤中所起作用的研究进展
组成型光形态建成蛋白(COP)1是调节植物在光照条件下生长和发育的重要分子.近年研究发现,COP1可表达于哺乳动物细胞中,参与调节DNA损伤修复、糖代谢、脂肪代谢及细胞自噬等生物学行为.此外,COP1在实体肿瘤与血液肿瘤中的异常表达与肿瘤进展及患者预后和存活密切相关.COP1作为E3泛素连接酶家族成员之一,可直接招募下游靶分子,如P53、c-Jun、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)α及ETV等,介导下游靶分子泛素化降解,进而参与肿瘤的发生、发展.笔者拟就COP1的生物学特性及其在肿瘤中的研究进展进行综述.
关键词： 组成型光形态建成蛋白1 泛素连接酶 E3 生物学特性 肿瘤
