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非限制性核酸内切酶文献资料
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非限制性核酸内切酶对狂犬病疫苗中Vero细胞DNA的去除作用
目的 评价非限制性核酸内切酶对狂犬病疫苗中Vero细胞DNA的去除效果.方法 将不同终浓度的Benzonase 非限制性核酸内切酶加入狂犬病病毒收获液中,在PBS或Tris两种缓冲体系下,以不同温度酶解不同时间,经分子筛层析纯化后,采用罗氏Ⅱ型高效地高辛DNA标记和检测试剂盒检测狂犬病病毒收获液中DNA的残留量,用确定的酶处理条件,采用酶检测试剂盒检测狂犬病病毒收获液中非限制性核酸内切酶的残留量,采用ELASA法检测抗原含量.结果 非限制性核酸内切酶的处理浓度为50 ～ 90 U／ml,缓冲体系为PBS或Tris,经37℃处理2～3h,转入18 ～ 26℃处理12～18 h酶解,再经分子筛层析纯化后,狂犬病病毒收获液中的Vero细胞DNA去除率在80％以上,病毒抗原回收率在75％以上;用确定的酶处理条件处理狂犬病病毒收获液,可使狂犬病病毒与Benzonase非限制性核酸内切酶完全分离.结论 采用非限制性核酸内切酶可有效去除狂犬病疫苗中Vero细胞残留DNA.
